益母草生物转化对苯二酚生成熊果苷的研究

来源 :湖南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lastkaixin
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熊果苷具有美白祛斑、镇咳、抗炎、抑制胰岛素降解等功效,近年来,化妆品市场和医药市场对熊果苷的需求量正逐年扩增。本研究选择益母草水培体系及悬浮细胞系,通过施加对苯二酚,进行熊果苷的转化研究。经多项实验研究,获得结果如下:1、水培益母草植株及其悬浮细胞系均具有转化对苯二酚生成熊果苷的能力;转化产物经HPLC和质谱分析,确认为β-熊果苷。2、熊果苷提取工艺优化为:取植物鲜品,80℃下热回流1 h,其中所用甲醇浓度70%,料液比1:10。3、水培益母草转化生成熊果苷最优条件为:以清水为媒介,对苯二酚5 mmol/L,配比蔗糖2.5 mmol/L,转化24 h;建议对苯二酚施加策略为单次叶面喷施或少量多次水培液施加。植株最高转化率为4.05%。4、益母草愈伤组织诱导及早期增殖配方选取MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;长期继代选取配方MS+2,4-D 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L;小苗下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体;继代纯化中,得到白、绿、紫三种颜色愈伤组织,其中绿色愈伤组织转化生成熊果苷能力最好;该绿色愈伤组织最佳继代、下悬浮时间为接种后第13 d左右;建立益母草悬浮细胞系后,接种第68 d适合继代、做转化;益母草悬浮细胞具有低耗氧、生物量增殖快的特性,其最大生物量可达到900 g/L。5、悬浮细胞转化生成熊果苷宜选择对苯二酚浓度6 mmol/L,转化时间36 h,此时转化效率最高;动力学研究中发现,转化时间延长或对苯二酚浓度增大,都会导致细胞解体并将胞内熊果苷全部释放到胞外。悬浮细胞的最高转化率为30.59%。通过以上实验结果可以看出,益母草植株和细胞都具有转化外源对苯二酚生成熊果苷的能力。利用细胞培养系统做转化,虽然转化率高,但无菌操作等技术和成本要求也很高;而利用植株作为转化体系,具有成本低、便于操作和推广的优势;利用植株作为转化主体,丰富了目前已有的生物转化体系,具有一定的理论价值和应用前景。尤其值得一提的是,叶面喷施方式比水培液施用(根部吸收)方式更好,转化率大大提高,施用方便,大田栽培时可借鉴。对于药用植物栽培中次生代谢产物的调控也有借鉴作用。
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