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前言 2,3,7,8-四氯二苯并-对-二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)是二噁英类环境污染物中毒性最强的一种,具有致畸、致癌、致突变作用。TCDD对生殖影响的机制尚不完全清楚。我们应用TCDD构建胎鼠生长发育异常的动物模型。探讨TCDD致畸与胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)基因表达以及其差异性甲基化区域(differentially methylated regions,DMRs)甲基化状态的关系。通过研究TCDD对培养大鼠肝癌BRL-3A细胞IGF2基因表达的影响以及对IGF2基因表达调控干扰的途径,为揭示TCDD致畸机制提供理论依据。 材料与方法 1.实验动物、细胞株与材料:健康成年Wistar大鼠;大鼠肝癌BRL-3A细胞株。RNA提取及逆转录相关试剂;兔抗鼠IGF2多克隆抗体;兔抗鼠C/EBPα多克隆抗体;兔抗鼠C/EBPβ多克隆抗体;实时定量RT-PCR(real-time quantitative RT-PCR)及Western blot相关试剂;DNA提取及亚硫酸氢盐测序相关试剂;电泳泳动迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫共沉淀实验(Chromatin Immunoprecipitafton Assay,ChIP)相关试剂;MTT检测和细胞凋亡检测相关试剂。 2.方法: 2.1 动物研究相关部分:成年雌性Wistar大鼠20只,随机分为实验组和对照组,应用阴道栓查精子方法确定受孕时间。妊娠第10天,实验组经胃管注入溶于矿物油的TCDD(10μg/kg),正常对照组注入同等剂量的矿物油。分别于受孕第15天和20天剖宫取胎,观察胎鼠发育情况,收集胎鼠不同组织。应用real-time quantitative RT-PCR、免疫组化及Western blot方