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鞘翅目害虫是目前影响农作物和林木产量、品质的重要靶标昆虫类别，在世界广泛分布，由于其具有钻蛀性、土壤栖居性和迁飞性很难有效防治，当前主要防治策略是以化学农药为主、生物防治为辅。化学农药的长期施用对害虫天敌以及有益昆虫也具有毒杀作用，极易打乱生态平衡，而且高残留性也造成环境污染，因而生物农药以其靶向性强、对环境无污染、对人畜安全等优点逐渐被人们重视。目前，相关学者对应用苏云金芽孢杆菌防治鞘翅目害虫的研究日益重视，已经成为国内外研究的热点方向之一。本试验从全国采集的土样中，分离Bt菌株，通过室内测定生物活性筛选出对鞘翅目害虫具有高毒力的菌株；摸索毒力最高的Bt菌株B.HLJ-37最佳发酵条件及最优发酵培养基组分；克隆、表达高效杀虫基因。结果如下：1.使用温度筛选法从100份土样中分离出47株野生型Bt菌株，利用典型鞘翅目害虫黄粉虫作为靶标昆虫进行室内生物活性测定，有8株菌对黄粉虫死亡率达到70%以上。毒力测试结果显示，菌株B.HLJ-37毒力最强，对黄粉虫48h LC50为382.02mg/L，对榆蓝叶甲48h LC50为507.43mg/L。对杀虫效果较好的8株菌进行形态学、生理生化及cry基因型鉴定，初步判断B.HLJ-37为山东亚种，含有cry8Ea类基因；B.SD-26为山东亚种，含有cry8Aa类基因；B.HLJ-66为励木亚种，含有cry8Ba类基因；B.AH-6为励木亚种，同时含有cry1Ab类和cry8Ea类基因；B.HLJ-60为云南亚种，含有cry8Ba类基因；B.JL-3为武汉亚种，同时含有cry3Aa和cry11b1类基因；B.AH-2为以色列亚种，同时含有cry1Ac类和cry8Bb类基因；而B.HLJ-47与已公布的各亚种生理生化指标各不相同，还需结合其他方法进一步确定其亚种类型，含有cry3Aa类基因。2.对毒力最高的Bt菌株B.HLJ-37进行一系列单因素摇瓶发酵实验，摇瓶环境下最佳发酵条件为：使用种子液龄期为10h；种子液接种量为2%；摇床转速为200r/min；发酵温度为30℃；培养基初始pH值设置在77.5之间；发酵时间为48h。使用优化后的参数进行摇瓶发酵，可测得活芽孢数达到9.05×108CFU/mL，活菌数达到3.01×109CFU/mL，晶体蛋白含量为20mg/mL。设计正交试验（7因素3水平）以确定菌株B.HLJ-37的发酵培养基最优组分：葡萄糖0.3%、玉米粉1.5%、豆饼粉2%、鱼粉1.0%、酵母粉1.5%、K2HPO40.2%、CaCl20.3%。3.成功克隆出了cry8Ea基因。测序结果表明该基因由3481个碱基组成，基因编码的蛋白质由1161个氨基酸构成。分析其编码蛋白质的理化性质：分子式为C5862H9012N1574O1835S24，分子量为131666.9，等电点为5.03，为弱酸性蛋白。cry8Ea蛋白二级结构主要由-螺旋和无规则卷曲交错构成。将cry8Ea插入pET-28a后构建重组表达载体pET28a-cry8Ea，将其转化到BL21中。诱导表达后，经SDS-PAGE分析，在大肠杆菌BL21中表达出130kD大小的蛋白，将目的蛋白纯化后，经过杀虫活性验证，cry8Ea的蛋白表达产物对黄粉虫没有杀虫活性；对榆蓝叶甲具有较高的毒力，其LC50达501.28mg/L。