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产壳聚糖酶青霉属菌(Penicillium sp)发酵粗酶液经20-70%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤层析,对壳聚糖酶进行分离纯化,经纯化后酶的比活力为845U/mg,纯化151倍。酶的最适温度和pH分别为50℃和5.0,金属离子Mg2+和Ca2+对酶活力有一定的促进作用,重金属离子Cu2+,Ni2+和Zn2+对酶有较强的抑制作用,该壳聚糖酶具有很强的底物专一性,动力学参数Km值为2.60lg/L。 以几丁质为载体,戊二醛为交联剂,固定壳聚糖酶,对壳聚糖酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1克几丁质与5ml5%戊二醛交联,固定2mg壳聚糖酶,最佳固定时间8hr,在此条件下酶活力回收可达70%。固定化酶的最适温度和pH分别为60℃和4.0,动力学参数Km值为27.0lg/L。将固定化酶于70℃水浴保温150min,酶活力未见明显下降。该固定化酶具有良好的操作和保存稳定性。 采用酶降解法制备壳寡聚糖,分别考察了温度、pH、加酶量等因素对酶降解反应的影响,确定了酶降解的最佳条件为温度50℃,pH 4.5。采用3%壳聚糖作为底物浓度进行降解,降解产物通过离子交换色谱进行分离,得到了聚合度分别为2-9的壳寡聚糖。采用渗透气压法(VPO)对不同降解时间的降解产物进行分子量测定,其测定的分子量分别为1746、3295、3482。