【摘 要】
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大白菜在我国广泛种植,但土壤盐碱化严重威胁其生长发育和产量品质。为此,本文在对不同基因型大白菜耐盐性鉴定基础上,以耐盐性显著不同的两个大白菜品种为试材,研究了盐碱胁迫下植株的生长状况、渗透调节物质、光能利用特性和活性氧代谢等变化特征,并通过转录组分析筛选耐盐基因,以期探明大白菜对盐碱胁迫的响应特性。主要研究结果如下:1.不同基因型大白菜的盐害指数均随着盐胁迫(0.5%Na Cl)天数的增加明显升高
【基金项目】
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山东省双一流学科(SYL2017YSTD06)
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大白菜在我国广泛种植,但土壤盐碱化严重威胁其生长发育和产量品质。为此,本文在对不同基因型大白菜耐盐性鉴定基础上,以耐盐性显著不同的两个大白菜品种为试材,研究了盐碱胁迫下植株的生长状况、渗透调节物质、光能利用特性和活性氧代谢等变化特征,并通过转录组分析筛选耐盐基因,以期探明大白菜对盐碱胁迫的响应特性。主要研究结果如下:1.不同基因型大白菜的盐害指数均随着盐胁迫(0.5%Na Cl)天数的增加明显升高,但不同基因型之间存在显著差异。通过逐步回归分析,建立了大白菜苗期盐害指数与相关参数的数学模型,发现与幼苗相对鲜质量和叶片相对电解质渗透率两个因子相关性较高,决定系数高达0.9815(P<0.001)。以入选的两个因子为统计参数进行聚类分析,结果与盐害指数的分析结果一致,表明可以其作为大白菜耐盐性鉴定的便捷指标。筛选出‘青华’(耐盐)和‘碧玉’(盐敏感)两个品种进行后续试验。2.利用筛选出的耐盐品种‘青华’和不耐盐品种‘碧玉’进行盐碱交互胁迫处理发现,‘青华’虽然耐盐但是对碱敏感,而‘碧玉’虽然盐敏感但是耐碱性强,具体表现为:‘青华’在盐处理下的生长没有受到显著抑制,脯氨酸、有机酸及碳水化合物含量显著增加,Na+含量增加较少,但是碱处理下,电解质渗透率显著增加,渗透调节物质含量变化不显著,K+、Ca2+、Mg2+含量显著减少;‘碧玉’在盐胁迫下受到显著损伤,Na+增加量为298%-364%,显著高于‘青华’中的Na+含量,碱处理下渗透调节物质增加,Mg2+含量仍维持较高水平,且根系苹果酸含量增加显著。3.‘青华’叶片在盐胁迫下,净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、水利用效率(WUE)、PSII的最大光化学量子产率(Fv/Fm)和非光化学淬灭(NPQ)没有表现显著受抑制情况,但在碱胁迫下净光合速率降低了10%-29%;‘碧玉’在盐胁迫下光能利用率受到显著抑制,净光合速率下降了18%-26%,Gs、WUE和Fv/Fm也显著下降,在碱处理下‘碧玉’叶片的净光合速率没有受到显著损伤,WUE维持在较高水平,表明高耐性大白菜具有较高的光能利用能力。4.‘青华’在盐胁迫下SOD、POD、CAT、APX、DHAR和MDHAR酶活性提高到150%-200%,基因表达量也显著升高为对照的2.5-3.5倍,但是碱胁迫下其抗氧化酶的活性和相对表达量没有显著变化,H2O2和MDA的含量与对照相比分别增加143%-190%和234%-294%;‘碧玉’在盐处理下H2O2和MDA的含量分别显著增加到152%-208%和240%-263%,但在碱胁迫下其H2O2和MDA的含量没有显著增加,但是抗氧化酶活性和基因表达量均显著增加。5.通过对盐胁迫处理15d的‘青华’和‘碧玉’进行转录组测序分析,共发现2859个差异表达基因(DEGs),‘青华’的DEGs数量显著低于‘碧玉’。Cation/H+antiporter17、V-H+-ATPase和VDAC在‘青华’中的表达量比‘碧玉’中高,在青华Na+和H+的交换中发挥正面作用,使Na+维持在液泡中,同时也维持了青华中Ca2+的含量。此外,‘青华’中GOLS相关基因表达量比‘碧玉’中高,缓解了盐胁迫引起的渗透压,对‘青华’的耐盐性有为积极作用。6.通过对转录组数据进一步分析,筛选出11个关键基因,对11个基因在‘青华’和‘碧玉’的根系和叶片中的表达量进行测定,发现其中4个基因的表达水平与大白菜的耐盐性呈高度正相关。为了更精确选取关键基因,我们测定了这4个基因在39个大白菜品种中的表达量,发现Br GOLS2基因在各品种中的表达量与品种的耐盐性相关性最高。7.盐胁迫诱导大白菜中Br GOLS2基因的表达。对Br GOLS2基因进行生物信息学分析、基因克隆和构建超表达载体,发现Br GOLS2的开放阅读框(ORF)长度为993 bp,编码含有330个氨基酸的蛋白。对Br GOLS2蛋白进行分析预测得到分子量大约为37.86k D,无跨膜结构区。Br GOLS2蛋白序列与拟南芥和盐芥中的GOLS2亲缘关系相近,对比相似度分别为99%和87.83%。成功克隆到Br GOLS2基因将其转入农杆菌进行烟草亚细胞定位,发现其特异表达于细胞膜。
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