论文部分内容阅读
该文利用独角莲根茎的水提取物(the aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium giganteum Engl.,AEoTGE)作用于肝癌细胞SMMC-7721,利用倒置相差显微镜、荧光显微镜、MTT技术、FCM技术、微阵列技术、DD RT-PCR技术,Northern技术等,从不同层面,首次研究了独角莲对SMMC-7721细胞的增殖、周期、凋亡和基因表达等方面的影响.1.利用抑制性消减杂交技术,对肝癌及癌旁组织进行抑制性消减杂交,构建人肝癌组织特异表达cDNA文库.消减产物经PCR扩增后,连接载体进行克隆.共得到1820个克隆,其中1776个克隆有100~800bp的插入片断,阳性率达98﹪.204个cDNA克隆测序结果表明这些克隆的功能涉及肝癌的发生和发展的多个方面,所构建的人肝癌组织特异表达cDNA文库完整,代表性强.2.倒置相差显微镜观察发现,独角莲能够显著抑制SMMC-7721细胞的生长,并引起细胞生长的形态学变化,随作用时间延长抑制作用更加明显.荧光显微镜观察发现独角莲能够诱导SMMC-7721细胞发生细胞凋亡,作用时间延长凋亡效应更加明显.3.噻唑氮蓝(MTT)比色实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定研究进一步证明:独角莲能较强抑制SMMC-7721细胞的生长,诱导细胞凋亡.该研究还发现独角莲具有阻滞SMMC-7721细胞生长于.S期的作用.4.利用抑制性消减杂交技术构建的肝癌与癌旁的cDNA消减文库,构建微阵列芯片,检测独角莲作用肝癌细胞系SMMC-7721细胞引起基因表达发生的变化在微阵列芯片上的表现.独角莲作用肝癌细胞SMMC-7721,研究发现有16个基因表达明显上调,2个基因表达明显下调.这些差异表达的基因为进一步研究独角莲作用肝癌的分子机制提供了线索,并为独角莲抗癌有效成分的筛选提供了效应基因.5.利用mRNA差异显示技术,研究独角莲根茎水提取物作用肝癌细胞SMMC-7721后引起的细胞基因表达变化,筛选后发现一个基因明显上调,一个基因明显下调.测序、网上搜索比对发现上调基因为10号染色体上RP11-179H18区域上的cDNA FLJ43274,但其功能还没有研究.下调基因为一个新基因片段,该基因片段前半部分与人类基因多条染色体上的序列高度同源,后半部分与支原体上的一个基因片段有高度同源性,其功能还有待进一步的实验验证.6.应用MTT技术还对6个单方中药和7个复方中药对肝癌细胞系SMMC-7721细胞的生长作用进行了研究,结果显示其中的3个单方,2个复方对SMMC-7721细胞生长抑制作用明显,1个单方对SMMC-7721细胞生长具有促进作用.利用微阵列芯片研究了其中对SMMC-7721细胞具有生长抑制作用的2个单方、2个复方,对SMMC-7721细胞基因表达的影响.