MicroRNAs调控人脂肪源性干细胞成骨分化及ODN影响其调控的研究

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本实验的目的是识别miRNAs是人脂肪源性干细胞(human Adipose–Derived Stem Cells,hADSCs)成骨分化的一个调控因子,探讨对成骨分化有调节作用的寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)是否通过调控miRNAs的表达从而调节成骨分化。从人脂肪抽吸物中分离hADSCs,体外培养扩增及鉴定。对hADSCs成骨分化的效率进行评估。检测miRNA-196a、microRNA-133a在hADSCs成骨分化中的表达以及Runx2、HOXC8的蛋白表达。将ODN C2及C12加入hADSCs成骨诱导培养基中诱导hADSCs成骨分化,以成骨诱导培养基诱导的hADSCs作为对照。检测三组成骨能力的变化,miRNA-196a、microRNA-133a表达的变化,Runx2、HOXC8蛋白表达的变化。结果证明hADSCs有极强的向成骨细胞分化的能力。miRNA-196a的表达在hADSCs成骨分化的过程中增强,伴随着HOXC8蛋白表达降低。提示miRNA-196a在hADSCs成骨分化中有重要作用,它的作用是通过HOXC8这一靶点介导的。通过本实验,miRNA-133a对成骨分化是否有调控作用尚不十分明确。本实验结果显示ODN C2及C12对成骨有抑制作用,是通过下调miRNA-196a表达水平,增加HOXC8的蛋白表达来实现的。本实验研究证明miRNAs是hADSCs成骨分化的调控因子;首次将ODN应用于hADSCs的成骨分化过程中,显示其对hADSCs的成骨分化有抑制作用;并证明ODN C2及C12对成骨的抑制作用是通过下调miRNA-196a表达水平,增加HOXC8的蛋白表达实现的。为hADSCs应用于临床作为组织工程骨的种子细胞及探索对成骨分化有影响的药物开发提供新的思路。
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