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目的:
基于组织芯片了解Cripto-1(CR-1)基因在人卵巢癌中的作用;了解CR-1基因在不同卵巢癌细胞中表达水平;构建CR-1真核表达质粒组和CR-1siRNA组,分别转染卵巢癌细胞株,观察对卵巢癌侵袭和迁移的影响。
方法:
采用免疫组织化学法检测50例卵巢癌标本中CR-1及VEGF的表达,分别分析CR-1蛋白及VEGF与临床分期、病理分级、组织类型及淋巴结转移的关系,并分析CR-1蛋白与VEGF表达的相关性。应用荧光实时定量PCR检测CR-1基因在不同卵巢癌细胞系中的mRNA水平与蛋白水平。通过脂质体(Oligofectamine)转染法将CR-1基因siRNA转染卵巢癌细胞,并构建CR-1真核表达质粒组,通过比较转染后的卵巢癌细胞与高表达及未转染的卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移能力,进一步探讨CR-1在卵巢癌发生、发展中的机制。
结果:
1.卵巢组织中Cr-1和VEGF的表达
1)CR-1蛋白表达于卵巢癌细胞浆,阳性表达率为74.0%(37/50),其表达与临床分期(x2=7.73,P<0.01)、病理分级(x2=6.25,P<0.05)、淋巴转移(x2=6.63,P=0.01)呈正相关,而与组织类型(x2=2.87,P>0.05)无明显相关;
2)VEGF表达于卵巢癌细胞浆,阳性表达率为72.0%(36/50),其表达与临床分期(x2=9.43,P<0.01)、淋巴转移(x2=4.73,P<0.05)呈正相关,而与病理分级(x2=2.31,P>0.05)、组织类型(x2=0.57,P>0.05)无明显相关;
3)CR-1的表达与VEGF的表达(x2=4.22,P<0.05)呈正相关;
2.在所检测的组细胞系中,卵巢癌OVCaR-3细胞株CR-1mRNA的表达水平最高。
3.卵巢癌细胞经CR-1基因siRNA转染后,其CR-1基因的mRNA水平与蛋白水平明显降低,且增殖、侵袭及迁移能力明显下降。
4.卵巢癌细胞经CR-1基因真核表达质粒转染后,其CR-1基因的mRNA水平与蛋白水平明显升高,且增殖、侵袭及迁移能力明显上升。结论:CR-1蛋白的表达与卵巢癌的侵袭、转移密切相关,是导致预后不良的因素。在临床工作中,研发针对CR-1基因的靶向药物有望对卵巢癌的治疗取得新进展。