由猪传染性胸膜肺炎杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，App）引起的猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）和多杀性巴氏杆菌（Pasteurellamultocide）引起的猪萎缩性鼻炎（Porcine infectious atrophic rhinitic，AR）以及猪肺疫（Swine plague）是猪场常见的呼吸道传染病，常呈混合感染。感染病猪呼吸道结构被破坏，容易受到其他呼吸道病原菌的感染，常给世界养猪业带来巨大的经济损失。因此，有必要开发一种联合疫苗对上述猪病进行预防。本研究利用A型猪源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H成功构建了pCDNA-ompH基因疫苗，并将其装载到猪胸膜肺炎杆菌菌影中，制备了胸膜肺炎杆菌菌影装载pCDNA-ompH基因的二联疫苗，再通过小鼠攻毒试验评估其免疫保护效果，为该疫苗的临床应用奠定了实验基础。试验中将小鼠分成四组，其中三组分别用App菌影、pCDNA-ompH基因疫苗、App菌影装载pCDNA-ompH基因二联疫苗进行免疫接种，最后一组作为对照。共进行三次免疫，每次间隔2周，免疫一周后断尾采血，利用间接ELISA法检测抗体效价；最后一次免疫后2周用最小致死量活菌攻毒，观察一周，对于攻毒期间死亡小鼠进行剖检，采集心、肝、脾、肺、肾进行病理组织分析；一周后统计活鼠数量，解剖并观察病理变化，取血样本用于抗体测定，取心、肝、脾、肺、肾脏器用于病理组织分析。试验结果显示：App攻毒开始后小鼠出现食欲下降、精神沉郁、被毛粗糙、呼吸困难等现象，攻毒后App菌影疫苗免疫组死亡1只、App菌影疫苗装载pCDNA-ompH基因疫苗免疫组无死亡、对照组全部死亡，App菌影和App菌影装载pCDNA-ompH基因二联疫苗对最小致死量App I型活菌攻毒的保护率分别为90%和100%；Pm攻毒组小鼠出现食欲下降、被毛凌乱、腹泻、呼吸困难、反应迟缓等现象，攻毒后pCDNA-ompH基因疫苗免疫组死亡3只，App菌影装载pCDNA-ompH基因二联疫苗免疫组无死亡，对照组全部死亡，pCDNA-ompH基因疫苗和App菌影装载pCDNA-ompH基因二联疫苗对最小致死量Pm D型活菌攻毒的保护率分别为70%和90%。血清型A型多杀性巴氏杆菌的外膜蛋白H构建的基因疫苗，可以对血清型D型多杀性巴氏杆菌的攻毒产生交叉保护效力。病理切片分析可见App攻毒对照组的肺脏和肝脏淤血严重，肺部有凝固性坏死，菌影疫苗组和二联疫苗组存活小鼠则无明显病变或病变较轻；Pm攻毒对照组肾脏可见淤血、坏死、水泡变性，肺脏肺间质增宽和大面积淤血出血以及炎性细胞浸润等病变，攻毒存活的小鼠肾脏有轻微出血现象，肺部有轻微的淤血，其余各器官均正常。对比免疫前后和攻毒后小鼠，App菌影装载pCDNA-ompH二联疫苗组小鼠抗体滴度略高于App菌影组和pCDNA-ompH基因疫苗组，二联疫苗免疫的保护效果高于单一疫苗的免疫。本研究说明菌影装载基因疫苗构建二联疫苗的方法可行，已经取得的实验数据，可为进一步对猪传染性胸膜肺炎、猪萎缩性鼻炎以及猪肺疫的免疫保护奠定实验基础。