【摘 要】
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褪黑激素（Melatonin,Mel）是一种具备多种生物功效的吲哚类激素,主要在松果体中合成。其具有调控动物机体生理节律、内分泌,控制动物季节性繁殖等功能。ASMT,即乙酰血清素甲基转移酶,参与褪黑激素合成的关键酶。本研究旨在从分子水平研究鸡ASMT基因的转录调控及其与产蛋性状的关联,为育种工作奠定基础。试验以济宁百日鸡为研究材料,首先对济宁百日鸡产蛋率和累计产蛋数曲线拟合分析;然后通过5’RAC
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褪黑激素（Melatonin,Mel）是一种具备多种生物功效的吲哚类激素,主要在松果体中合成。其具有调控动物机体生理节律、内分泌,控制动物季节性繁殖等功能。ASMT,即乙酰血清素甲基转移酶,参与褪黑激素合成的关键酶。本研究旨在从分子水平研究鸡ASMT基因的转录调控及其与产蛋性状的关联,为育种工作奠定基础。试验以济宁百日鸡为研究材料,首先对济宁百日鸡产蛋率和累计产蛋数曲线拟合分析;然后通过5’RACE确定ASMT基因转录起始位点,扩增其5’调控区,寻找其核心启动子区;最后寻找ASMT基因5’调控区SNPs,并将其与产蛋性状关联分析。主要研究结果如下:（1）杨宁模型对济宁百日鸡产蛋率拟合效果最好,R2达到0.990,高于伍德模型（R2=0.699）、分室模型（R2=0.891）和三次方程（R2=0.887）。三种非线性模型对济宁百日鸡累计产蛋数拟合度较好,拟合度都超过0.99,其中Von Bertalanffy模型的拟合度最好,达到了0.999;Gompertz模型次之,R2为0.997;Logistic模型最低。R2为0.990。（2）确定了ASMT基因的转录起始位点,其mRNA 5’UTR长19bp,序列为GCCTCAATACTAAAGGAAG,转录起始位点为碱基G。（3）构建ASMT基因5个启动子删除载体,转染3种细胞,分析荧光素酶活性,得出-271-3为核心启动子区。该区域生物信息学分析发现,存在Sp1、GATA-1、Oct-1、NF-1等多种转录因子结合位点。（4）济宁百日鸡ASMT基因5’调控区共检测到32个SNPs,多态性极为丰富。其中2个位点低度多态,其余位点均为中度多态。-672位点与总产蛋数关联显著（P<0.05）,作用方式为显性效应;该位点GG型总产蛋数显著比GA型多7.41个,比AA型多2.96个。-550位点与前期产蛋数关联显著（P<0.05）,作用方式为加性效应;AA型前期产蛋数比GG型和GA型分别多3.96个、3.52个。-254位点对开产日龄和前期产蛋数有显著影响（P<0.05）,TT型个体开产日龄早于CC型和CT型5天,前期产蛋数分别增加4.39个、3.8个。该位点对开产日龄的作用方式为显性效应和加性效应,均显著（P<0.05）。其中,-254位点位于ASMT基因的启动子核心区域。（5）所有SNP位点单倍型分析发现:-786、-550、-529、-254位点连锁,构建3种单倍型CGCC、CGTC、TATT。但是,每种单倍型均与产蛋性状关联分析不显著。综上所述,杨宁模型和Von Bertalanffy模型分别对济宁百日鸡产蛋率和累计产蛋数拟合效果最好;鸡ASMT基因的转录起始位点为碱基G,-271-3为ASMT基因的核心启动子区;济宁百日鸡ASMT基因5’调控区共检测到32个SNPs,-672、-550和-254位点对产蛋性状有显著影响。其中,-254位点位于启动子核心区域,与开产日龄和前期产蛋数关联分析显著。
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