黄瓜果实RFOs降解部位及其与酸、碱性α-半乳糖苷酶关系的研究

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与大多数高等植物不同,黄瓜(Cucumis sativus L.)是以棉籽糖家族寡糖类(Raffinose family oligosaccharides, RFOs)作为光合产物的主要运输形式(主要是水苏糖和棉籽糖)。水苏糖经过长距离运输到达果实后,在果实哪个部位分解尚不明确,一种观点认为RFOs在果柄分解成蔗糖等,再运输至果实;另一种观点认为RFOs可以通过果柄运输到果实,在果实中快速分解。水苏糖在分解过程中,α-半乳糖苷酶起到重要的作用,而6种α-半乳糖苷酶(三种碱性形式和三种酸性形式)中哪一类或哪一种对分解水苏糖起主要作用,尚没有统一观点。为此,本研究以黄瓜果柄、果实和甜瓜果柄为实验材料,对韧皮部汁液进行可溶性糖含量的测定。同时,还以黄瓜果柄、果实前端和去除黄瓜第二果实后,第一果实果柄为实验材料,对可溶性糖含量和6种α-半乳糖苷酶基因表达水平、活性进行比较。推测碱性α-半乳糖苷酶主要负责水苏糖水解之后,使用特殊化学诱导表达载体pX6/pX7进行黄瓜两种碱性α半乳糖苷酶RNAi载体的构建,将用于后期黄瓜转基因研究。所得结果如下:1、黄瓜果柄、果实都是水苏糖和棉籽糖分解的场所,分解持续进行。从黄瓜果柄至果实,韧皮部汁液中水苏糖和棉籽糖的含量逐渐降低,到达果实末端含量最低,蔗糖、果糖和葡萄糖的含量逐渐升高。各种可溶性糖含量从果柄至果实一直存在变化,但变化比较缓慢。2、黄瓜果实水苏糖卸载中碱性α-半乳糖苷酶起主要作用。对黄瓜果柄和果实前端分段取样,将6种α-半乳糖苷酶基因表达水平、活性与可溶性糖含量相比较,结果显示水苏糖和棉籽糖的含量与碱性a-半乳糖苷酶基因表达水平和活性变化趋势相反,而与酸性α-半乳糖苷酶无明显的关系。去除第二果实后,对第一果实果柄汁液和组织中可溶性糖含量,以及果柄组织6种α-半乳糖苷酶基因表达水平和活性的研究表明,碱性α-半乳糖苷酶基因表达水平和活性与棉籽糖和水苏糖上升幅度一致,而酸性α-半乳糖苷酶没有表现出相应的变化趋势。3、甜瓜果柄存在水苏糖的分解。甜瓜果柄汁液中,棉籽糖和水苏糖含量从茎端到果端逐渐降低,蔗糖、葡萄糖和果糖表现出逐渐升高。4、成功构建碱性α-半乳糖苷酶Ⅰ和Ⅱ RNAi载体。使用特殊化学诱导表达载体pX6/pX7进行α-半乳糖苷酶Ⅰ和Ⅱ RNAi载体构建,通过电泳检测和测序比对,确定两种RNAi载体构建成功,可用于后期黄瓜转基因研究。
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