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昆虫细胞培养作为细胞工程的基础之一,是动物细胞培养工程中的一个重要方面,也是现代生物学上一项极有价值的技术,已广泛应用于生物学、医学和农业的各个领域。家蚕作为一种模式昆虫,对家蚕细胞进行体外培养,应用培养细胞进行理论研究和生产应用,长期以来倍受关注。虽然前人在这方面做了大量工作,但现有的家蚕细胞系数量仍然偏少,且应用于生产的家蚕细胞系极少。家蚕基因组框架图完成以后,家蚕功能基因组研究工作的大量开展需要提供不同发育时期、不同分化程度、不同组织特异性的家蚕细胞系作为研究平台。为了满足家蚕细胞生物学、发育生物学和分子生物学研究、建立新的杆状病毒表达载体系统以及家蚕细胞工程及转基因家蚕研究等方面的需要,我们开展了建立和研究新的家蚕细胞系的工作。 本研究通过对家蚕反转期胚胎组织进行一年多的原代培养,记录了在此过程中相继出现的多种分化和转分化组织和细胞,发现原代培养过程中不同分化程度的组织、细胞明显具有增殖现象,并且证明这种增殖主要是细胞有丝分裂的结果。以后分离筛选出高繁殖细胞群体,建立了SWAU2-BmE细胞系,并对其进行了以下多项生物学特性研究: 从外部形态看,SWAU2-BmE细胞形态比较单一,呈短梭形或圆形,个体很小,属上皮型贴壁生长细胞系。细胞铺平率高达80%以上。 在保存方面,SWAU2-BmE细胞在更换培养液的情况下在4℃冰箱里能贮存的时间超过了150d,远长于BmE、BmN、Hi5、Sf9、St21细胞系。在液氮中保存的时间除BmE细胞比较短以外,其它几种细胞系无大的差异,均能在270d后复苏。 在生长速度方面,在细胞接种120h到192h是SWAU2-BmE细胞的对数生长期,在192h时细胞浓度达到顶峰,细胞群体倍增时间为51.8小时。表明SWAU2-BmE细胞生长速度快,繁殖力强。 在有丝分裂和染色体方面,SWAU2-BmE细胞系的染色体具有鳞翅目昆虫染色体的典型特征,中期染色体呈短杆状或颗粒状,其着丝粒是弥散型着丝粒。二倍体细胞(2n=56)比例高达89.76%,属二倍体细胞系,未见异常有丝分裂现象。较好地保持了家蚕胚胎细胞的有丝分裂和染色体特征。 在对BmNPV敏感性方面,同样条件下,对照细胞系BmE、BmN、Hi5、Sf9、Sf21在接种BmNPV 192h均未发现多角体。SWAU2-BmE细胞在接种病毒48h后就可见到少量细胞内产生了多角体,96h后就有56.17%的细胞产生了多角体,在120h时,感染率快速上升到86.95%,在192h时绝大多数细胞(96.75%)已产生多角体,并且多数细胞已经破裂。测得其TCID50值为1.581×107。表明SWAU2-BmE细胞系对BmNPV高度敏感。 RAPD指纹图谱和SSR指纹图谱均显示,SWAU2-BmE细胞系与原蚕种材料的遗传距离