【摘 要】
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在PCR引物两端加上合适的酶切位点后扩增大鼠CuZnSOD cDNA,经双酶切后与表达载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选出正确的重组质粒pBV-RCS,经质粒稳定性检测,证明该重组质
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在PCR引物两端加上合适的酶切位点后扩增大鼠CuZnSOD cDNA,经双酶切后与表达载体pBV220连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选出正确的重组质粒pBV-RCS,经质粒稳定性检测,证明该重组质粒在宿主菌中能稳定存在,加入一定浓度的金属离子经42℃诱导后,RCS得到了高表达,薄层扫描测定表达蛋白占菌体总蛋白的49﹪,目前国内外SOD表达菌株中,该菌株为高表达菌株.表达蛋白以包涵体形式存在于菌体内,用超声波破壁后,经透析复性和烯释复性后表达蛋白可以恢复部分活性.该论文还就不同的诱导条件对重组蛋白表达效率的影响进行了探索,总结出重组蛋白的最佳诱导表达条件.转化子经37℃培养至OD值为0.4时,加入Cu<2+>(终浓度为0.5mM)和Zn<2+>(终浓度为0.1mM),在42℃诱导5小时后重组蛋白表达量最高.
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