髓样分化因子88与人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol耐药性相关

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实验目的:通过外源改变髓样分化因子88(myeloiddifferentiation factor88,MyD88)的表达,明确其与紫杉醇耐药的相关性,检测MyD88对细胞生物学活性的影响。实验方法:通过在A2780/Taxol细胞中用特异性siRNA敲低和过表达MyD88后,利用real-time PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测MyD88的表达变化;CCK-8法检测细胞转染前后对紫杉醇耐药性的变化,Western Blot检测磷酸化蛋白激酶B(pAkt), X-连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)以及多药耐药蛋白(MDR1)的表达变化,流式技术检测MyD88对细胞周期和凋亡的影响。实验结果:敲低MyD88表达水平,耐药细胞株A2780/Taxol对紫杉醇的耐药性明显降低(p<0.01),抗凋亡能力减弱(p<0.01),同时抑制pAkt通路的活性或抑制MDR1的表达后A2780/Taxol细胞的耐药性也出现明显下降;过表达MyD88后,细胞对紫杉醇耐药性增加(p<0.05)。实验结论:抑制卵巢癌细胞中MyD88的表达,能促进耐药细胞株对紫杉醇的敏感性,为临床卵巢癌耐药患者以MyD88为靶向的基因治疗提供了新思路和手段。
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