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CmPP16(Cucurbita maxima phloem protein-16)蛋白是在南瓜中发现的一种类病毒运动蛋白,有CmPP16-1(16.5 kD)和CmPP16-2(15.6 kD)两种同源形式,它(们)可以非序列特异性的结合RNA分子(也包括其自身的mRNA),形成核糖核蛋白复合物,并且具有扩大胞间连丝运输通道的作用,从而完成其系统性运输,在植物的系统发育及信号转导过程中发挥重要作用。
本实验通过RT-PCR从中国南瓜品种——‘谢花甜’南瓜中克隆得到了CmPP16-1和CmPP16-2蛋白的cDNA序列。测序后,选取序列与已报道的CmPP16-2同源蛋白cDNA序列(AF079171)完全一致的CmPP16-2的cDNA序列,通过体外DNA重组技术,构建重组质粒pET-28a(+)-CP2(含有CmPP16-2表达序列),表达纯化出分子量约为18.6 kD的N端带有组氨酸标签的CmPP16-2融合蛋白,制备了CmPP16-2的多克隆抗体,ELISA及Western检测抗体效价(以1:6000的比例稀释后可识别20 ng左右的CmPP16-2融合蛋白)。利用该抗体对不同植物材料中CmPP16的系统运输情况进行了研究。
我们以“谢花甜”南瓜为砧木,以黄瓜栽培品种“吉杂四号”为接穗,通过十字嫁接法得到嫁接植株,研究CmPP16蛋白的系统运输情况。利用制备的多克隆抗体对嫁接植株以及“谢花甜”南瓜植株不同部位CmPP16蛋白表达情况进行了检测。结果显示,在“谢花甜”南瓜的根、茎、老叶、新叶中都检测到CmPP16-1和CmPP16-2,可以作为CmPP16蛋白在南瓜植株中系统性运输的证据。对嫁接植株材料中CmPP16蛋白运动的研究结果说明,CmPP16-1和CmPP16-2的表达及系统运输模式不同,其功能也必然存在差别。本实验利用CmPP16-2蛋白的多克隆抗体对不同植物材料中CmPP16蛋白的系统运动情况进行了初步研究,为近一步研究CmPP16的功能及植物系统运输奠定了基础。