2,4-D和磺胺二甲基嘧啶残留ELISA检测试剂盒的研制

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sil87sil
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农药和兽药的广泛使用,可以给农业和畜牧业生产带来效益,这也导致了药物在农产品和动物源性食品中的残留,最终对食品卫生和人类健康造成危害。 国内外已建立了很多理化方法检测农产品和动物性食品中的药物残留,虽然有些方法比较灵敏准确,但由于花费大、时间长、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种快速、灵敏、特异的方法,酶联免疫吸附测定正逐渐应用于药物的残留检测。本研究对未有免疫原性的2,4-D和SM2小分子的官能团进行了修饰改造,制备出了2,4-D和SM2的免疫原,并利用这些免疫原分别制备出了多克隆抗体,进行了抗体的效价、特异性等性能的鉴定,建立了2,4-D和SM2的ELISA系统测定方法,并制备出了ELISA检测试剂盒。 1.为了解决2,4-D缺乏免疫原性问题,筛选出碳化二亚胺法和混合酸酐法两种方法进行对小分子2,4-D的改造与合成,制备出了具有免疫原性的2,4-D免疫原和检测原,经聚丙烯凝胶电泳和紫外分光光度计鉴定,证实人工免疫原合成成功。通过常规方法免疫新西兰大白兔获得了多克隆抗体,其效价高达160,000。 在国内首次建立起间接竞争ELISA检测2,4-D的测定方法,标准曲线检测限为50ng/mL,检测范围为50~2,000ng/mL。通过交叉反应测定与2-甲基-4-氯丙酸、2,4-二氯苯氧丙酸和2-甲基-4-氯苯氧乙酸3种苯氧乙酸类药物几乎无交叉反应。初步组装了具有自主知识产权的2,4-D的ELISA快速检测试剂盒,并通过精密度、回收率、保存期等试验对试剂盒各个指标进行了检测,结果均达到了试剂盒的国家标准。 2.为了制备针对SM2的多克隆抗体,用戊二醛法将小分子SM2偶联到牛血清白蛋白(BSA),制备出具有免疫原性的SM2复合抗原。免疫新西兰大白兔获得了理想的抗体,其效价为40,000。 建立了间接竞争ELISA检测SM2的测定方法,其标准曲线检测限为2ng/mL,检测范围为2~100ng/mL。通过交叉反应测定与磺胺嘧啶(SD)、磺胺间二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺吡啶(SPY)、磺胺喹噁啉(SQ)和磺胺噻唑(ST)5种磺胺类药物无交叉反应。同样组装了SM2的ELISA快速检测试剂盒,并通过精密度、回收率、保存期等试验对试剂盒各个指标进行了检测。
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