论文部分内容阅读
恶性肿瘤严重危害公众健康,是全球范围导致死亡的主要原因,而90%以上的癌症患者死于肿瘤转移。肿瘤局部的抑制性免疫微环境是肿瘤细胞逃避宿主免疫监视、进行性生长和转移的关键因素,也是目前肿瘤常规治疗失败的重要原因。抑制性免疫微环境主要由抑制性免疫细胞、细胞因子、趋化因子及酶类组成。细胞核转录因子Stat3在抑制性免疫微环境形成过程中发挥了关键作用。例如,肿瘤细胞的Stat3组成性活化不仅可主动诱导肿瘤局部抑制性免疫微环境形成,其转录产物也促进肿瘤生长和转移。但是,肿瘤细胞如何维持Stat3组成性活化的机制则仍然没有得到阐明。最近的研究提示,肿瘤细胞可以主动或被动释放大量损伤相关分子模式(DAMP)分子,激活模式识别受体(PRRs),激活或抑制相应的细胞信号传导通路,引发相应的细胞生物学反应,包括诱导炎症反应、刺激血管新生和基质重构,参与抑制性免疫微环境形成,既促进肿瘤细胞增殖和转移,也是肿瘤免疫微环境形成的重要机制。TLRs是一组重要的PRRs,既介导病原相关分子模式(PAMPs)分子也介导DAMPs引起的免疫反应。同样的抗原与某些TLR亚型相互作用引起免疫增强反应而与另外的TLR亚型相互作用引起免疫耐受。例如,同样的抗原与TLR4相互作用引起免疫刺激反应而激活TLR2可诱导抑制性免疫反应。因此,我们假设TLR2可能与肿瘤细胞的DAMPs相互作用,介导肿瘤细胞Stat3组成性活化,导致抑制性免疫微环境形成。首先,我们证明了人类及小鼠的多种肿瘤细胞表达多种TLRs;利用Pg-LPS激活肿瘤细胞TLR2信号,可诱导肿瘤细胞Stat3活化,产生大量IL-6、IL-10等抑制性细胞因子。进一步实验证明肿瘤细胞可通过主动释放HSP60,持续活化肿瘤细胞TLR2信号,维持Stat3的组成性活性,从而形成一种正反馈机制,维持TLR2-Stat3信号系统活化和抑制性免疫微环境形成。无论是阻断肿瘤细胞的TLR2活性,还是阻断宿主的TLR2活性,均可显著抑制Stat3活性,逆转肺组织局部抑制性免疫微环境,减少B16F10黑色素瘤细胞肺转移,提高荷瘤动物生存率。我们的研究结果不仅证明,模式识别受体TLR2活化是肿瘤细胞引起免疫耐受的重要原因,也强烈提示TLR2是开发防治肿瘤生长和转移药物的药靶。CD19是重要的B细胞标志分子。我们的前期工作发现黑色素细胞瘤也表达CD19。因最近有研究提示CD19是B细胞TLR信号通路中重要的接头分子,而我们已经发现激活TLR2是肿瘤细胞Stat3组成性活化的重要原因。因此,我们假设CD19通过与肿瘤组织产生的某些DAMPs分子相互作用,引起肿瘤细胞核转录因子Stat3组成性活化,促进肿瘤生长和转移。我们发现,B16F10黑色素瘤细胞膜表面的CD19介导了HSP60通过TLR2所致Stat3组成性活化这一过程；阻断CD19可抑制肿瘤细胞自身释放的HSP60所诱导的Stat3活化,下调MMP-2、VEGF及c-Myc等促癌蛋白表达,抑制肿瘤细胞上皮-间叶转化(EMT),抑制IL-10等抑制性细胞因子分泌。因此,无论是预防性,还是治疗性给予中和性CD19抗体,无论阻断肿瘤细胞CD19信号,还是阻断小鼠全身CD19信号,均可抑制肿瘤细胞所致肺局部抑制性免疫微环境的形成,减少肿瘤细胞的肺转移,提高动物生存率。联合使用CD19抗体与经典抗肿瘤药吉西他滨,可进一步抑制肿瘤生长和转移,显著降低荷瘤动物的死亡。我们的研究结果不仅证明B细胞表面抗原标志分子CD19对肿瘤细胞引起的免疫耐受发挥了重要作用,也强烈提示CD19是一个开发防治肿瘤生长和转移药物的潜在药靶。