肾炎宁方对IgA肾病模型大鼠肾脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响

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目的:IgA肾病(IgAN)是当今世界上最常见的原发性肾小球疾病。本研究通过动物实验,观察肾炎宁对IgA肾病大鼠的24h尿蛋白定量、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾脏组织中TNF-α、NF-κ B表达情况的影响,探讨该方对IgA肾病肾脏组织损害的治疗作用。   方法:将30只健康雄性SD大鼠,体重130g±10g,适应性喂养1周后用代谢笼收集检测尿蛋白和潜血均为阴性,按体重随机分为3组,每组10只,分别为正常组、模型组和肾炎宁组。除正常组外其余各组均给予隔日口服0.1%牛血清白蛋白(BSA)酸化水6周,于第7周开始每周连续3天尾静脉注射BSA缓冲液,连续6周,于第8周追加注射葡萄球菌肠毒素B(SEB),每周1次,连续3周以复制IgA肾病模型,正常组大鼠口服及注射等量生理盐水。第9周开始肾炎宁组给予肾炎宁煎剂灌胃,正常组、模型组均灌服等量生理盐水,共给药8周。分别于造模前、造模后第5周末、第7周末、第11周末、第16周末代谢笼收集24h尿液,行24h尿蛋白定量测定。16周末处死大鼠,股动脉取血,检测血清肌酐、尿素氮含量,留取肾脏组织,光镜下观察大鼠肾小球的变化,免疫荧光观察IgA沉积情况,免疫组化及聚合酶链反应(PCR)对肾组织中TNF-α和NF-κ B进行半定量分析。   结果:   1.24h尿蛋白定量   造模前各组大鼠24h尿蛋白定量均无差异;造模第5周末,模型组和肾炎宁组大鼠24h尿蛋白定量均明显升高,与正常组相比差异有统计学意义(P<0.05)。造模第7周末,模型组和肾炎宁组大鼠24h尿蛋白定量较第5周末有所升高,但两者之间仍无差异;造模第11周末,肾炎宁组大鼠的24h尿蛋白定量较模型组明显减少,且差异有统计学意义(P<0.05)。造模第16周末,肾炎宁组大鼠的24h尿蛋白定量较模型组明显减少,差亦有统计学意义(P<0.05)。   2.血Scr和BUN   正常组、模型组与肾炎宁组相比,大鼠血清Scr及BUN差异无统计学意义(P>0.05)。   3.肾脏病理形态学观察   光镜下,正常组肾小球结构完整,肾小球系膜、基质未见明显异常改变;模型组可见肾小球系膜区明显增宽、系膜细胞增生、系膜基质增多;肾炎宁组也均有不同程度的病理改变,但与模型组相比病变减轻。   免疫荧光观察:正常组肾小球系膜区无免疫复合物沉积,模型组可见免疫复合物沿肾小球系膜区呈颗粒状分布,肾炎宁组也可见不同程度的免疫复合物沉积,但较模型组减轻。   4.对大鼠肾组织TNF-α蛋白及其基因表达的影响   免疫组化染色显示:TNF-α主要表达于肾小球系膜细胞胞浆内,半定量分析结果显示:与正常组相比,模型组和治疗组的表达要明显加强(P<0.05),与模型组比较,肾炎宁组的表达要明显降低(P<0.05)。   RT-PCR结果显示:与正常组相比,模型组和治疗组表达明显升高(P<0.05),而与模型组比较,肾炎宁组大鼠肾组织TNF-α表达则明显降低(P<0.05)。   5.对大鼠肾组织NF-κ B蛋白及其基因表达的影响   免疫组化染色显示:NF-κ B主要表达于肾小球、肾小管细胞胞核内,半定量分析结果显示:与正常组相比,模型组和治疗组阳性增强的核占的百分比显著增加(P<0.05),与模型组比较,肾炎宁组的表达明显降低(P<0.05)。   RT-PCR结果显示:与正常组相比,模型组和治疗组表达显著增加(P<0.05),与模型组比较,肾炎宁组的表达明显降低(P<0.05)。   结论   1.肾炎宁方能改善IgA肾病大鼠的一般状况,减少尿蛋白的排泄,保护大鼠的肾功能。   2.肾炎宁方可减轻肾组织病理损害,延缓IgA肾病的进展。   3.肾炎宁方可能通过下调TNF-α和NF-κ B在肾脏的表达,延缓IgA肾病肾组织的纤维化进展。
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