骨骼的原发性肿瘤相对少见，发生于骨的肉瘤仅占人类全部肿瘤的0.2％，但是它们的发病年龄特殊，尤其是骨肉瘤，主要发生在10-20岁的青少年，且致畸致残率高，因此其发病机制、诊断和治疗已引起广泛关注。 根据临床表现、影像学检查和病理特征，骨肿瘤典型病例一般可以作出正确诊断。但对于不典型病例的鉴别诊断尚有诸多困难，如骨母细胞瘤需要与侵袭性骨母细胞瘤和骨母细胞型骨肉瘤相鉴别，增生活跃的软骨瘤需要与高分化软骨肉瘤鉴别．目前，免疫组化是临床病理最常用的鉴别诊断技术，对肿瘤的诊断有着不可替代的作用。骨肿瘤还没有特异的免疫标记，寻找准确可靠的免疫组化标记物对于临床病理诊断工作来说有着十分重要的意义。而且，骨肿瘤的病因和发病机制尚未明了，还需要进一步探索。 在肿瘤发生发展过程中，由中心体异常导致的肿瘤细胞极性改变和染色体的不稳定性正成为近年的研究热点。微管蛋白(tubulin)作为中心体的重要组成部分，参与染色体的运动、有丝分裂和细胞周期的调控。目前在真核生物中已确认的微管蛋白有7种[2]，其中α、β和γ微管蛋白主要参与了中心体的构成，α和β微管蛋白首尾相连构成中心粒的三连体微管，γ微管蛋白是中心粒周围基质(pericentriolar matrix，PCM)中比较有代表性的一种蛋白，对微管的形成和微管极性的确定有重要作用。研究表明许多疾病都与微管蛋白的变化有关，只要细胞DNA发生变化，细胞有丝分裂受到影响，都可表现出微管蛋白的改变，微管蛋白量的改变在一定程度上反应了中心体量的改变。统计研究资料表明，无论是成骨性肉瘤，还是成软骨性肉瘤，均有染色体结构和数量的变异，称为染色体的不稳定性，导致非整倍体形成。已有文献报道骨肉瘤中非整倍体的形成与γ微管蛋白增加和中心体扩增密切相关，但是骨肿瘤中其它微管蛋白的表达情况及其与骨肿瘤的发生发展、分化演进的关系尚未明确。 本研究采用免疫组织化学方法，对良、恶性成骨性和成软骨性肿瘤中α、βⅡ、β微管蛋白的表达进行检测，观察分析其表达状况。并采用蛋白印迹法(Western Blot)，对新鲜骨肿瘤标本进行定量分析，探讨微管蛋白在骨肿瘤发病中的作用及其在临床病理诊断中的意义。 材料与方法 收集1995年5月—2008年5月中山大学附属第一医院诊断明确的成骨性肿瘤151例，将病例分为4组，分别为纤维结构不良26例、骨母细胞瘤26例、侵袭性骨母细胞瘤12例、骨肉瘤87例(骨母细胞型骨肉瘤64例，其它类型骨肉瘤23例)；软骨性肿瘤128例，将病例分为3组，分别为软骨瘤28例，软骨母细胞瘤49例、软骨肉瘤51例(高分化软骨肉瘤29例，中低分化软骨肉瘤22例)，采用免疫组化染色方法检测α、βⅡ、β微管蛋白和Ki67的表达。 提取7例新鲜骨肿瘤手术标本(包括骨母细胞瘤1例，软骨母细胞瘤1例，软骨母细胞瘤伴骨母细胞瘤1例，普通型骨肉瘤4个亚型各1例)的蛋白质，通过Western Blot技术对微管蛋白在骨肿瘤中的表达行定量分析。 实验结果 1.α—微管蛋白在成骨性肿瘤均有表达，在良性和中间型病变中表达(+)，骨肉瘤表达(++)，4个样本组间比较，差异有统计学意义 (F=6.44，P=0.000)。纤维结构不良、骨母细胞瘤和侵袭性骨母细胞瘤，组间无显著差异(P>0.05)，骨肉瘤表达明显增高，与其余三组比较，组间有显著差异(P均<0.05)；骨母细胞瘤、侵袭性骨母细胞瘤和骨母细胞型骨肉瘤3个样本组进行比较，骨母细胞型骨肉瘤α微管蛋白表达最高(++)，明显高于其它两组，差异有统计学意义(P=10.811，P=0.000)。 2.在成骨性肿瘤的4个样本组中，各组βⅡ—微管蛋白的表达均很低，4个样本组间比较，差异无统计学意义(P=1.044，P=0.375)，任意两组间的差异也无统计学意义(P均>0.05)；骨母细胞瘤、侵袭性骨母细胞瘤和骨母细胞型骨肉瘤3个样本组间比较，组间无显著差异(F=2.104，P=0.127)。 3.β—微管蛋白在纤维结构不良和侵袭性骨母细胞瘤中呈阴性表达，在骨母细胞瘤和骨肉瘤中表达增强，4个样本组间比较，差异有统计学意义(F=8.180，P=0.000)，纤维结构不良与骨母细胞瘤/骨肉瘤比较，侵袭性骨母细胞瘤与骨肉瘤比较，差异均有统计学意义(P均<0.05)，其余各组之间比较差异无统计学意义(P均>0.05)；骨母细胞瘤、侵袭性骨母细胞瘤和骨母细胞型骨肉瘤三组进行比较，侵袭性骨母细胞瘤与骨母细胞型骨肉瘤组间差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.Ki67指数在纤维结构不良、骨母细胞瘤、侵袭性骨母细胞瘤和骨肉瘤中的指数分别是0.73，1.50，3.38和16.39，前3组之间组间无差异，第4组明显增高，统计有显著差异(P<0.05)。 5.在软骨性肿瘤3个样本组中，α—微管蛋白在软骨瘤和软骨肉瘤中表达(+)，软骨母细胞瘤表达(++)，3个样本组间比较，差异有统计学意义(P=3.446，P=0.035)，软骨瘤和软骨母细胞瘤组间差异也有统计学意义(P＜0.05)． 6.在软骨性肿瘤3个样本组中，βⅡ—微管蛋白在软骨瘤呈阴性表达，软骨母细胞瘤和软骨肉瘤中表达(+)，3个样本组间比较，差异有统计学意义(F=8.493，P=0.000)，软骨母细胞瘤与软骨肉瘤之间无组间差异(P>0.05)，软骨瘤与其它两组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。 7.在软骨性肿瘤3个样本组中，β—微管蛋白在软骨瘤表达呈阴性，软骨母细胞瘤和软骨肉瘤中表达(+)，3个样本组间比较，差异有统计学意义(P=23.212，P=0.000)，任意两组组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。 8.软骨瘤与高分化软骨肉瘤比较，高分化软骨肉瘤中βⅡ、β—微管蛋白表达(+)，明显高于软骨瘤，差异均有统计学意义(P均<0.05)。中低分化软骨肉瘤中β—微管蛋白表达(一)，明显低于高分化软骨肉瘤(+)，差异有统计学意义(P＜0.05)。 9.Ki67指数在软骨瘤、软骨母细胞瘤和软骨肉瘤中分别为0.11，0.88，14.5(高分化5.66，中低分化26.3)，前两组之间无组间差异(P>0.05)，第3组明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)。 10.在收集的7例新鲜手术标本中，骨母细胞型骨肉瘤和纤维母细胞型骨肉瘤可检测到α和βⅡ—微管蛋白表达，其余病例均阴性；4例骨肉瘤均可检测到β—微管蛋白表达，其余3例良性骨肿瘤阴性；γ—微管蛋白在3例骨肉瘤(除混合型骨肉瘤外)和1例软骨母细胞瘤可检测到，其余病例弱表达。 结论： 1、α、β、βⅡ—微管蛋白均高表达于骨肉瘤，提示可能通过影响中心体扩增参与了骨肉瘤的发生发展过程，并在良性、中间性和恶性成骨性肿瘤的鉴别诊断方面起到一定的辅助作用。 2、β和βⅡ—微管蛋白高表达于软骨肉瘤，且βⅡ—微管蛋白与软骨肉瘤分化程度密切相关，分化程度越高，表达越强，提示两者在良恶性软骨性肿瘤的鉴别诊断方面有一定的辅助诊断作用。 3、Ki67指数在成骨性肿瘤和软骨性肿瘤中都呈现了从良性→中间性→恶性逐渐升高的显著趋势，且Ki67表达水平与骨肿瘤的恶性程度密切相关，提示Ki67是协助判断骨肿瘤性质、恶性程度的重要参考指标。