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目的： ASPP（Apoptosis-stimulating protein of p53）蛋白家族是一种与p53基因功能密切相关的蛋白家族。这个蛋白家族包括ASPP1、ASPP2和iASPP三个成员。ASPP1和ASPP2可增强p53的抑癌功能，而iASPP却是这个抑癌基因家族中一个特殊的成员。因为它与ASPP1和ASPP2有着相似的结构域，可同ASPP1和ASPP2竞争与p53结合，发挥着与两者相反的作用。这可能是某些肿瘤中p53处于野生状态却不发挥其作用的原因之一。c-jun氨基末端激酶（c-jun N-terminalkinase，JNK）通路是MAPK信号转导通路重要的通路之一。JNK的激活可被细胞因子（TNF-α，IL-1）、生长因子（EGF）、应激刺激（如紫外线、电离辐射、热休克、高渗透压刺激及氧化损伤等）、及某些G蛋白偶联的受体等多种因素激活。在细胞增殖与分化﹑维持细胞的形态﹑细胞的凋亡与恶变以及应激反应等多种细胞调控方面起到重要的作用。本实验通过应用RNA干扰技术沉默非小细胞肺癌细胞A549(p53野生型)的iASPP基因，观察未转染的非小细胞肺癌细胞与转染的非小细胞肺癌细胞经化疗药物顺铂（CDDP）处理后的增殖及凋亡的变化，同时研究转染和CDDP对非小细胞肺癌细胞中JNK活性和c-Jun的表达的影响，为探讨iASPP介导的RNA干扰治疗奠定一定基础。方法：将iASPP干扰质粒及阴性对照质粒转染到A549细胞中；荧光显微镜对转染后细胞进行拍照，观察转染效果；运用MTT方法筛选化疗药物CDDP最小有效浓度，初步检测CDDP对未转染的非小细胞肺癌细胞与转染的非小细胞肺癌细胞的生长抑制情况；用CDDP最小有效浓度处理上述细胞24小时后，免疫沉淀法及Western blot检测JNK/SAPK活性和c-Jun的表达。实验数据用SPSS13.0统计软件处理，均数比较用方差分析（ANOVA），P＜0.05认为有统计学意义。结果：1.经荧光显微镜照相显示：已将阳性质粒（si1和si2）及转入阴性质粒（sin）成功转入A549细胞。2.MTT检测结果显示：CDDP对未转染和转染的A549细胞的增殖均有一定的抑制作用，当CDDP浓度小于3μg/ml时，几乎不影响未转染和转染的A549的细胞的增殖。而当CDDP浓度大于3μg/ml时，随着药物浓度的增高， A549细胞的抑制率也升高增加（P＜0.05）。并且转入阳性质粒（si1和si2）的A549细胞的抑制率高于未转染的A549细胞、只加转染试剂的A549细胞及转入阴性质粒（sin）的A549细胞的抑制率。3.JNK免疫沉淀及Western blot检测结果显示：正常A549细胞中JNK/SPAK具有基础活性。转染后的A549细胞其磷酸化的c-Jun的表达高于转染前的A549细胞其磷酸化的c-Jun的表达。CDDP（6μg/ml）处理未转染、只加TurboFect、转入阳性质粒（si1和si2）及转入阴性质粒（sin）A549细胞24小时后，各组A549细胞其磷酸化的c-Jun的表达较用药前都有所增高。结论：1.化疗药物CDDP对未转染和转染的A549细胞都有抑制作用，转染后的A549细胞能增强细胞对CDDP的敏感性。2.正常A549细胞中JNK/SPAK呈低表达现象。沉默A549细胞中的iASPP基因后，转染后可增强A549细胞的JNK/SAPK的活性.经CDDP处理后，可以激活细胞中JNK/SAPK的活性，使其磷酸化的c-Jun表达增强，说明CDDP对A549细胞中的JNK/SAPK可能存在激活作用，并且RNA干扰iASPP基因后能增强这一作用。