【摘 要】
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免疫佐剂是一种增强剂,它能有效地发挥免疫调节作用,它与抗原同时或提前注入机体,能够对特定的抗原产生更加高效持久的免疫应答,甚至可以改变其免疫应答的类型,并且能够减少疫苗抗原用量。随着研究免疫学技术的发展,佐剂已广泛应用于针对人和动物的疫苗。近年来,研究者发现佐剂填补了许多疫苗免疫原性较弱的缺点,因此需要免疫佐剂的辅助以加强其免疫效果。研究者发现植物多糖有多种生物学活性和功能。本研究以新疆阿魏菇、杏
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区科技支疆项目（201591134）；
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免疫佐剂是一种增强剂,它能有效地发挥免疫调节作用,它与抗原同时或提前注入机体,能够对特定的抗原产生更加高效持久的免疫应答,甚至可以改变其免疫应答的类型,并且能够减少疫苗抗原用量。随着研究免疫学技术的发展,佐剂已广泛应用于针对人和动物的疫苗。近年来,研究者发现佐剂填补了许多疫苗免疫原性较弱的缺点,因此需要免疫佐剂的辅助以加强其免疫效果。研究者发现植物多糖有多种生物学活性和功能。本研究以新疆阿魏菇、杏鲍菇和无花果为实验材料,探讨阿魏菇多糖、杏鲍菇多糖和无花果多糖经肌肉途径免疫小鼠对犬卵透明带3DNA疫苗的免疫佐剂活性;通过培养小鼠树突状细胞（Dendritic cells,DCs）,在体外探讨三种多糖对DCs成熟的初步作用机制。通过这些研究为筛选新型高效安全的免疫佐剂提供新思路和实验基础。1植物多糖对犬透明带3 DNA疫苗免疫增强活性的研究本研究主要采用本实验室制备的三种植物粗多糖包括阿魏菇多糖（Pleurotus ferulae polysaccharide,PFP）、无花果多糖（Ficus carica polysaccharide,FCP）和杏鲍菇多糖（Pleurotus eryngii polysaccharide,PEP）作为佐剂增强犬透明带3（Canine zona pellucida 3,CZP3）DNA疫苗的免疫不育效果。将不同浓度的三种多糖分别与犬透明带3 DNA疫苗联用,肌肉免疫ICR小鼠,共计3次。在无菌条件下制备小鼠脾细胞悬液,利用流式细胞仪测定MHCⅡ+、CD86+、CD4+和CD8+的细胞的百分率;通过ELISA法检测抗体水平;MTT法检测淋巴细胞增殖;3次免疫后,将具有正常生育能力的雄鼠按照1∶3的比例与雌鼠进行合笼,统计雌鼠生育率和窝仔数。综合评价三种多糖配伍pc DNA3-CZP3疫苗的免疫效果。结果表明,与单独免疫pc DNA3-CZP3的疫苗组相比,100μg PFP、100μg PEP和10μg FCP显著性增高了小鼠抗原特异性的Ig G抗体及亚型的水平;增加了CD4+T细胞和CD8+T细胞的百分比;提高了Con A诱导的T淋巴细胞增殖和LPS诱导的B淋巴细胞增殖;显著性的增强DCs表面成熟标志物MHCⅡ+和CD86+的表达水平;合笼后显著降低小鼠的生育率和窝仔数。结论三种植物多糖作为佐剂均增强了pc DNA3-CZP3疫苗的体液免疫水平和细胞免疫水平;增强了T、B淋巴细胞增殖;促进了DCs的成熟;提高了CZP3 DNA疫苗免疫不育的效果。这些研究结果为植物多糖作为DNA疫苗佐剂提供了实验依据,也为筛选安全有效的新型植物多糖佐剂提供参考。2植物多糖对DCs成熟的初步研究DCs成熟代表着机体的免疫功能的增强,本实验以小鼠DCs为研究对象,研究了PEP和FCP对小鼠DCs成熟的作用。利用显微镜观察多糖刺激后DCs的形态学变化;流式细胞术检测DCs表面分子的变化;MTT法检测多糖对DCs和脾脏的毒性和增殖作用;检测PEP和FCP诱导NO释放的能力。结果形态学的结果表明PEP和FCP可以刺激DCs的成熟分化;低浓度的多糖促进DCs和脾脏增殖,高浓度的多糖对DCs有一定的毒性作用,而对脾脏没有毒性作用;PEP和FCP剂量依赖性的增高CD86+和MHCII+的表达量促进DCs成熟同时呈剂量依赖性的增加NO的释放量;释放的NO对DCs成熟呈正反馈作用。综合评价FCP促进DCs成熟的活性高于PEP。综上所述,三种多糖对均能够增强犬卵透明带3DNA疫苗诱导产生的免疫反应,显著性提高了疫苗的免疫不孕效果,减少怀孕率和窝仔数,并且对正常的细胞没有显著性的毒性作用。其佐剂作用可能是通过并且促进DCs的增殖和成熟。这为筛选高效安全的DNA疫苗佐剂提供了候选材料。
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