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目的：敏感性皮肤是一种特殊的皮肤类型，易出现红斑、丘疹、脱屑、毛细血管扩张等客观症状。红斑的病理表现是真皮乳头层毛细血管网扩张而产生的红色斑疹，严重影响美观。 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在皮肤主要由角质细胞分泌，具有促使血管新生、扩张以及增加血管通透性等活性。进一步研究表明：就血管扩张及通透性增高而言，VEGF121亚型较其他亚型作用明显，且很可能是造成炎症性皮肤病红斑的主要原因。因此我们考虑如果能减少VEGF的分泌或有效抑制其作用，将会达到改善皮肤泛红的功效。 一氧化氮(Nitric oxide，NO)即血管舒张因子，广泛存在于动植物体内，它作为信号传导因子，发挥多种生理病理学作用，具有促进血管扩张，增加血管通透性等作用，是目前史上发现最强的舒血管物质之一。正常人皮肤中，角质形成细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞都能产生NO，内源性NO在一氧化氮合酶(NOS)的作用下，由L-精氨酸氧化生成。NOS分为原生型(cNOS)和诱生型(iNOS)两种亚型，其中iNOS只在特殊情况下如：紫外线、TNF-α、IL-1β等多种炎症因子的作用下产生，故强调其病理作用明显。 木天蓼属猕猴桃科植物，落叶缠绕藤本，其果实、枝叶、根均可入药。据研究，木天蓼中含有生物碱、木天蓼内酯、B-苯乙醇等多种成分。可用于治疗多种疾病。2007年韩国学者从木天蓼中分离出具有抗炎效应的活性成分ALA(alpha-linolenic acid)，能明显的降低浮肿，并通过进一步研究证实：ALA通过阻断NF-κB和活化蛋白激酶途径(MAPKs)来抑制iNOS基因的表达，进而降低NO的含量，降低血管的通透性来发挥抗炎作用。 本研究着眼于敏感性肌肤的典型表现一红斑，定位于与血管扩张密切相关的VEGF，拟探讨：1)木天蓼对表皮角质细胞产生VEGF的影响，着重于是否抑制角质细胞产生VEGF；2)木天蓼是否可以通过抑制一氧化氮(NO)的过量产生而拮抗VEGF121诱导的血管扩张及高通透性，从分子生物学水平上揭示木天蓼改善皮肤红斑的作用机制，为研发缓解皮肤泛红的新型植物护肤品提供科学依据。 方法： 1木天蓼有效成分的提取。 2采用细胞体外培养技术研究木天蓼对角质细胞分泌VEGF的影响 (1)正常角质细胞体外培养； (2)采用不同浓度的木天蓼粗提取液对角质细胞进行刺激，24小时后将培养基回收，应用ELISA技术检测培养基中VEGF的浓度，并选定木天蓼的最佳作用浓度； (3)采用木天蓼的最佳作用浓度对角质细胞进行刺激，于不同时间将培养基回收，应用ELISA技术检测培养基中VEGF的浓度，选定木天蓼的最佳作用时间； (4)MTT法测定不同浓度药物作用下的细胞活力，检测不同提取物不同浓度对角质形成细胞是否有毒性反应。 (5)分析木天蓼是否抑制角质细胞产生VEGF 3木天蓼对VEGF121诱导NO过量产生的影响： (1)正常血管内皮细胞的体外培养； (2)采用含有2％血清浓度的培养基分别作为对照； (3)采用VEGF121、VEGF121+木天蓼、2％血清的培养基对细胞进行刺激；亚硝酸盐还原法检测木天蓼对一氧化氮(NO)的过量产生是否有抑制作用。 (4)确定木天蓼是否抑制NO的过量产生。 4统计分析 应用SPSS13.0软件进行统计学分析，数据表示用均数±标准差(x-±SD)，多个均数的比较使用随机区组的方差分析(ANOVA)，不同时间点上均数的比较采用重复测量(repeated measure)的方差分析，对不满足正态和方差齐性条件的样本量偏小的计量资料，采用非参数检验(Nonparametric test)的方法，p＜0.05为有显著性差异，具有统计学意义。 结果： 1不同浓度的水溶性提取物(APW)和醇溶性提取物(APE)对人角质形成细胞(HEK)分泌VEGF的影响： (1)应用ELISA方法检测培养基中不同浓度的APW和APE刺激下的VEGF水平：结果显示不同浓度APW和APE刺激下VEGF的水平有明显的差异，50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml的APE分别为(0.353±0.069、0.183±0.015、0.183±0.015)与同剂量APW(0.353±0.069、0.183±0.015、0.183±0.015)pg/ml相比，差异具有统计学意义(p＜0.05)，与对照组(0.541±0.012)pg/ml相比具有显著性差异(p＜0.05)，即APE刺激的角质形成细胞VEGF的水平明显低于APW和对照组，并具有剂量依赖性；不同浓度的APW与对照组和基质组相比，差别无统计学意义(p＞0.05)。 (2)MTT测定不同提取物不同浓度刺激下的细胞活力：结果显示不同提取物间对HEK活性无显著性差异(p＞0.05)，即不同浓度的APW和APE与对照组之间无明显的差别，且不同浓度不同基质的木天蓼提取物对角质形成细胞无明显的毒性反应。 2最佳浓度的APE在不同时间内对HEK分泌VEGF的影响： 100μg/ml的APE在24h和36h内(0.185±0.106、0.148±0.021)pg/ml与对照组(0.511±0.016、0.562±0.050)相比，差异具有统计学意义(p＜0.05)，MTT结果显示各时间点细胞活力相比，无显著性差异(p＞0.05)。 3应用硝酸盐还原法测定VEGF121刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)培养基中NO含量： 经APE+VEGF121组(3.263±0.367)μmol/ml处理的血管内皮细胞NO含量与VEGF121组(5.017±0.660)μmol/ml相比，具有显著性差异p＜0.01，与对照组(4.204±0.084)μmol/ml相比差异具有统计学意义(p＜0.05)，且对细胞活力无明显影响(p＞0.05)，基质(4.196±0.011)μmol/ml与对照组相比之间差异无统计学意义(p＞0.05)。 结论： 木天蓼乙醇提取物较水溶液提取物能明显抑制角质形成细胞分泌VEGF，且具有剂量依赖关系；木天蓼乙醇提取物可明显抑制VEGF121诱导的人脐静脉血管内皮细胞分泌NO，由此推断，木天蓼的醇提取物可通过抑制表皮角质细胞分泌VEGF并部分拮抗VEGF121诱导的NO的过量产生来改善敏感性肌肤的红斑。