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蛋白内含子(内含肽,intein)广泛分布于多种多样的生物体中,包括真细菌,古细菌和真核生物。在蓝细菌中存在着许多的蛋白内含子(内含肽),其中,许多已经在体外对其进行了生物化学的研究。但是,没有证据表明在蓝细菌细胞体内蛋白内含子(内含肽)的切除。在丝状体的鱼腥蓝细菌菌株Anabaena sp.strain PCC 7120中,DNA聚合酶Ⅲ中的α亚基,复制因子DnaE,由两个分离的开放阅读框架(ORF)所编码,这两个开放阅读框架分别位于Anabaena PCC 7120染色体上的两条链上,并且彼此相距约3.1 M bp,每个开放阅读框架中包含了一个蛋白内含子(内含肽)。该生物能进行细胞发育过程形成能进行固氮作用的细胞,即异形胞。异形胞是一种末端分化的细胞,在异形胞中细胞周期被终止。DNA复制过程是细胞周期过程中的关键步骤。既然DnaE是DNA复制过程中非常关键的成分,它也可以说是细胞周期中的关键蛋白,因此,我们希望能在蓝细菌中找到蛋白内含子(内含肽)能够在细胞内发生剪接的实验证据,并且确定成熟的DnaE蛋白是否在异形胞中依然存在。在本研究中,我们证实了由两个开放阅读框架(ORF)编码DnaE蛋白可以通过蛋白质反式剪接作用连接起来形成完整的DnaE蛋白。更有趣的是,我们第一次在蓝细菌体内检测到了蛋白质的反式剪接,这个发现使我们可以将异形胞和营养细胞中成熟DnaE蛋白的形成进行比较,结果显示,成熟的DnaE蛋白可以在两种细胞类型中形成。通过将两个分离的基因的启动子序列与gfp报告基因构建转录水平上的融合克隆,也证实了两个基因在营养细胞和异形胞中都进行了转录,并且发现在异形胞的分化过程中,转录水平没有很大的变化。尽管异形胞是末端分化的细胞,不能进行染色体的复制,但是DnaE在异形胞中的表达和成熟可能在DNA复制之外过程中担负一定的功能,如DNA的重组和修复。 DnaA是DNA复制起始蛋白,它在细胞周期中担负着必需的功能。因此我们也有兴趣对其在不同的细胞类型中的表达进行检测。实验结果显示DnaA的表达在细胞的发育过程中具有波动性,这可能意味着DnaA可能还有其它的功能,或在前异形胞还有表达。DnaA的温度敏感型突变体已经在大肠杆菌和链霉菌中获得,它有利于获得同步生长的培养物。本研究也尝试通过定点突变在Anabaena PCC 7120中筛选温度敏感型菌株,以便于考察细胞周期和异形胞分化之间的关系。温度敏感型突变体也是研究基因功能的好材料。初步筛选显示一些单交换的菌株出现对39℃温度敏感。