2010年,一种传染性关节炎疾病首先在广东和广西两省的本地品种肉鸡中爆发,随后逐步蔓延至全国十余个省、市,给我国养禽业带来了数亿元的经济损失。为系统深入地掌握该病的病因和流行特点、探究有效的防控措施,本研究开展了病原分离鉴定、流行病学分析、疫苗和药物防控研究等工作,结果如下。(一)本地品种鸡传染性关节炎病原鉴定与流行情况分析对来自16个省、市的本地品种肉鸡养殖场和种鸡场的18063份滑液囊分泌液拭子、1688份血清和215份患病鸡腿等样品进行分析后发现,滑液囊分泌液拭子Mycoplasma synoviae(M.synoviae)阳性率为96.31%,发病鸡只血清中M.synoviae阳性率为69.57%-95.16%,从215份患病鸡腿样品中分离的110株M.synoviae感染SPF鸡后,复制出典型的临床症状。研究结果表明,引起上述传鸡染性关节炎的主要致病原为M.synoviae。M.synoviae是引起鸡和火鸡出现急性或慢性传染性关节炎的一种重要病原。中国本地品种鸡中M.synoviae感染的流行病学特点表现为:1.种鸡场不同日龄群中M.synoviae感染具有普遍性,蛋传率高:8-29周龄鸡群抗体阳性率7%-97%不等;30周龄后鸡群抗体阳性率高达100%;7～9日龄的鸡胚核酸检测阳性率平均16.14%,最高阳性率可达36.8%。2.M.synoviae感染鸡体后抗体反应缓慢,呈现周期性排毒,水平传播能力强:1日龄雏鸡体内可同时检测到M.synoviae抗原和母源抗体,1日龄鸡群中10%的鸡只感染M.synoviae后鸡群中免疫产生的抗体初见于50日龄左右,100日龄抗体阳性达到100%;10-70日龄,鸡只带毒率为10-80%,呈现周期性升高的趋势。3.M.synoviae在中国流行范围广,本地品种鸡易感:流行病学数据分析发现,2010～2015年,在广东、广西、福建、浙江等16省均出现鸡M.synoviae感染和发病,共9773群鸡发病,超过1000万只鸡被淘汰;十多个本地品种鸡对M.synoviae易感,防控压力较大。4.种鸡抗体水平影响M.synoviae在子代肉鸡的水平传播和繁殖速度:对三个品种分析发现,竹丝鸡种鸡抗体水平最低、胚蛋感染率最高,子代肉鸡抗体呈现阳性最早、转阳性率最高;清远麻种鸡抗体水平最高、胚蛋感染率接近竹丝鸡,但子代肉鸡抗体呈现阳性最晚、抗体转阳性率最低。(二)鸡M.synoviae中国分离株遗传进化及其致病性测定将本研究中110株M.synoviea分离株和国外分离株vlhA基因76～421 nt区域推导氨基酸序列进行比对,结果发现共有6处区域存在明显的差异。遗传进化分析结果显示,绝大部分分离株属于新的K亚群,6个小分支,番鸭分毒株与疫苗株MS-H同属E基因亚群。K亚群不同毒株存在致病力差异,但不同分支分离株致病力差异无规律性。将M.synoviea分离株体外连续传代至70～77代后发现,各实验株VllhA蛋白序列均出现了不同程度的突变,突变集中在161～240、321～400位氨基酸区域。分离株QZ-ZZX的vlhA蛋白70～200位氨基酸区域130个氨基酸缺失后,致病力下降60%,说明此区域氨基酸与致病力存在密切关系。(三)鸡M.synoviae疫苗研制及免疫效果评估本研究研制出M.synovia 灭活疫苗,确定肌肉注射方式为免疫后保护效果评估的攻毒模式、HN03为灭活疫苗株、20和41日龄(0.3 mL/只/次)两次免疫为最佳的免疫程序,证实免疫灭活疫苗的SPF鸡、本地品种鸡对M.synoviae感染有不同程度的保护力(存在品种差异)。试验鸡接种两次灭活疫苗后,抗体水平维持在抗体阳性率≥60%、抗体滴度均值≥5000状态大约10周左右,通过加强免疫可迅速提升免疫鸡群的抗体水平。本地品种种鸡免疫后,其携带M.synoviae母源抗体的子代小鸡可以有效抵抗M.synoviae野毒的侵袭,抗体滴度越高,保护效果越显著,但是携带母源抗体的SPF小鸡抗M.synoviae侵袭能力相对较低。研究表明,本研究研制的灭活疫苗可以为免疫鸡及其子代提供保护力,抵抗M.synoviae野毒侵袭,但不能完全清除M.synoviae的影响。本研究还评估确定:0.2×104EID50传染性支气管病毒株IBV-GX与107 CCU M.synoviea分离株QZ-ZZX为MS-H疫苗免疫后最佳的共感染评估模型;免疫MS-H疫苗的鸡群人工感染M.synoviea可获得100%保护;临床应用MS-H疫苗免疫超过124万只本地品种肉鸡群,其群发病率和群内发病率相对未免疫鸡群分别降低了 20%和1.62%,本地品种肉鸡免疫MS-H可获得对M.synoviea感染的保护力。(四)鸡M.synviae药物防治效果评估·体外药敏测定结果显示,2012-2015年M.synoviae分离株对金霉素、泰万菌素、泰乐菌素、泰妙菌素、林可-大观霉素、多西环素等药物较为敏感,但对土霉素和诺氟沙星耐药性明显。鸡只感染M.synoviae后饲喂含金霉素饲料,只能延缓实验鸡只的发病时间(1-3天),但对感染结果无实质性影响;鸡只饲喂金霉素(150ppm)后感染M.synoviae,可延缓实验鸡发病、降低发病率,但不同毒株存在很差异;种鸡周期性饲喂含金霉素(400 ppm)和泰万菌素(50ppm)的饲料后,M.synoviae在鸡群体内生长繁殖受到有效抑制,药物防控时间越早、效果越明显。研究表明,药物防治可以降低M.synviae感染和发病率,适合作为M.synviae预防措施。(五)鸡M.synoviae综合防控措施应用评估本研究根据研究结果制定了一套M.synviae防控方案,并在全国16个M.synoviae感染高发的省(市)推广、应用和验证,结果收到良好的应用效果:M.synoviae感染发病的临床病例从2013年最高时的4500群,快速下降到2015年的不足1000群,月群内发病率超过1%的群数从2013年最高的300群减少到2015年不足50群。结果表明,通过采取本研究制定的综合防控措施,2013-2015年16个省应用养殖场M.synviae感染发病群数减少80%,发病情况得到有效控制。