【摘 要】
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微囊藻毒素(MCs)是由淡水蓝藻产生的,存在于河流、湖泊等淡水水体中,不能被常规的自来水处理工艺去除,并且可以富集在鱼类、贝类等水产品中,通过饮用水和食物链进入人体。MCs
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微囊藻毒素(MCs)是由淡水蓝藻产生的,存在于河流、湖泊等淡水水体中,不能被常规的自来水处理工艺去除,并且可以富集在鱼类、贝类等水产品中,通过饮用水和食物链进入人体。MCs根据结构不同有多种异构体,其中微囊藻毒素-LR(MC-LR)分布最广泛,具有强烈的肝毒性及其他毒性,严重威胁着人类的食品安全和身体健康。本实验通过戊二醛法将MC-LR与人免疫球蛋白及牛血清白蛋白进行偶联,成功制备了免疫原及检测原,通过足垫快速免疫法免疫BALB/c小鼠,常规方法进行融合,间接ELISA方法筛选阳性克隆,采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的亚克隆,最终建立了2B11杂交瘤细胞株,并对其单克隆抗体的效价、分子量、抗体亚类、纯度、蛋白质含量、亲和力、特异性等方面进行了研究。利用优化后的实验条件进行间接竞争ELISA检测并建立标准曲线,标准曲线的回归方程为y = -29.929x + 51.381,相关系数R2=0.9748。最低检测限0.1μg/mL。同时从杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,PCR法扩增出重链轻链基因,SOE-PCR法构建抗MC-LR单链抗体基因。
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