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长期以来,人们通过对乳品化学及营养学的研究发现,牛乳蛋白是许多具有潜在生物活性物质的前体。通过物理、化学、或生物分解作用,乳蛋白可被裂解成许多具有生物学功能的小肽,即乳源生物活性肽。这些小肽一般由2~20个氨基酸残基组成,能够对机体的消化系统、心血管系统、免疫系统和神经系统等多方面产生积极的影响,具有抗菌、抗氧化、抗高血压、免疫调节等生理活性。本课题以原料奶粉为研究对象,通过盐析、高速离心、超滤、凝胶层析4步从中分离纯化小肽,在凝胶层析色谱中按分子量分布洗脱出3个明显峰型;借助分子量标准品Bacitracin from Bacillus Licheniformis,收集了低分子量( 1.0kDa)区段的小肽组分PF-III。利用多肽凝胶层析洗脱峰的积分面积与其浓度之间存在正相关性,以分子量与样品小肽接近的Bacitracin from Bacillus Licheniformis为标准品,建立了浓度-洗脱峰积分面积标准曲线,并以此曲线测定了小肽组分的浓度为0.1313±0.0052mg/mL,推算得原料脱脂奶粉中,低分子量( 1.0kDa)小肽含量约为1.09%。随后对小肽样品的体外生理调节活性做出了评价:1)抗氧化活性,由DPPH?自由基清除实验,测得小肽样品清除率达到36.69±0.92%,显著高于阴性对照去离子水(26.05±0.34%),且低于阳性对照BHT(66.29±00.66%)和维生素E(97.20±0.53%)(P<0.05);2)抑制ACE活性,首先建立了ACE抑制实验中生成物HA的浓度标准曲线,选择峰面积-HA浓度的线性回归方程(R2=0.9956),然后从兔肺中提取得到ACE酶,测得酶活力为4.887±0.192U/mL;在此基础上,测定了小肽样品的体外ACE抑制率为20.12±7.59%,与作为阴性对照的磷酸缓冲液PBS有显著差异,且低于阳性对照10μM VPP(37.62±6.68%)、10μM IPP(56.97±2.40%)(P < 0.01)。最后,通过氨基酸分析仪检测了小肽样品的氨基酸组成情况,收集样PF-III中含有丰富的谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、天冬氨酸(Asp)和亮氨酸(Leu),并且疏水氨基酸总量很高,达到50.53%,对此测定结果结合其功能活性进行了分析,为奶粉中功能性成分的发现及进一步强化利用奠定了基础。