论文部分内容阅读
目的:建立BIU-87、EJ、T24三株膀胱癌细胞的体外高侵袭力亚系,观察膀胱肿瘤细胞的侵袭过程,并运用该亚系对膀胱癌细胞侵袭力与膀胱癌腔内种植转移的关系进行研究。方法:通过改良侵袭实验,以穿透人工基底膜和孔径为8μm的聚碳酸脂膜为依据,对BIU-87、EJ、T24三株膀胱癌细胞进行筛选,获得具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞亚系;通过生长曲线、细胞周期、体外侵袭力对母代与子代细胞体外增殖及侵袭能力进行对比,并对BIU-87、EJ、T24三株目前国内常用膀胱癌细胞的生物学行为进行研究;运用对传统体外侵袭实验中正在侵袭的膀胱肿瘤细胞的侵袭过程进行了观察;通过裸小鼠膀胱灌注膀胱肿瘤细胞,模拟体内膀胱肿瘤种植转移的过程,对膀胱肿瘤细胞侵袭力与膀胱癌腔内种植转移的关系进行了研究。结果:筛选出了BIU-87、EJ、T24三株膀胱癌细胞的体外高侵袭力亚系,筛选后的各子代细胞,经15代以上传代后,细胞形态与母代比较无明显变化。三株母代细胞中BIU-87的体外增殖速度最强（P＜0.05）;EJ与T24的体外增殖速度无显著性差异（P＞0.05）;三株母代膀胱癌细胞的增殖指数（proliferation index,PI）无显著性差异（10=0.568）;体外侵袭实验证实,BIU-87细胞的体外侵袭力高于EJ、T24（P＜0.05）,但穿过Matrigel和聚碳酸酯膜,掉到24孔板中的细胞数却较EJ、T24少（P=0.004）。各子代细胞的增殖速度较母代有明显加快（P＜0.05）,PI较母代细胞增大（P＜0.05）,体外侵袭能力较母代明显提高（p＜0.001）。通过扫描电镜观察到膀胱肿瘤细胞的体积较大,呈椭圆形,表面有微绒毛,贴在Matrigel上生长;一个或多个细胞伸出伪足固定在Matrigel上,并向聚碳酸酯膜上的小孔伸出伪足,正在穿过Matrigel及聚碳酸酯膜上的小孔。裸小鼠膀胱内种植转移研究发现,体外高侵袭力的膀胱癌细胞亚系,膀胱癌腔内种植转移的发生率较其母代高（P＜0.001）结论:运用改良侵袭实验,筛选膀胱癌细胞系的体外高侵袭力亚系的方法是可靠的,筛选出的体外高侵袭力膀胱癌细胞亚系细胞,体外增殖能力和体外侵袭能力均较其母代细胞高,为今后对膀胱癌侵袭及转移的研究提供了较为可靠的细胞模型;动物体内实验证实,体外侵袭能力高的膀胱肿瘤细胞更易发生膀胱腔内种植转移。