目的：诺斯卡品，又名那可丁，是来自罂粟属鸦片的邻苯二甲酸异喹啉生物碱，在过去几十年中一直被用作镇咳药。研究表明，诺斯卡品可作用于微管并抑制其动态不稳定性，干扰肿瘤细胞的有丝分裂进程，促进肿瘤细胞的凋亡。在动物实验研究中，各种剂量的诺斯卡品对组织或器官无任何明显的毒副作用，对体液免疫也没有明显的抑制作用，且均表现出良好的抗肿瘤活性。有望成为治疗卵巢癌的新型抗肿瘤药。本实验研究诺斯卡品对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP是否有增殖抑制、逆转耐药及可能机制。方法：1用不同浓度诺斯卡品作用于人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP，各浓度分别作用不同时间(24h、48h、72h)后,四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-basedcolorimetric assay，MTT)比色法测定不同药物浓度组，作用不同时间后对SKOV3/DDP细胞的抑制率。计算出诺斯卡品对SKOV3/DDP细胞作用24h后非细胞毒性浓度IC10。2在联合诺斯卡品非细胞毒性浓度作用下测定顺铂对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)，以此判断诺斯卡品能否增加耐药细胞对顺铂的敏感性。3用倒置显微镜观察单用顺铂、单用诺斯卡品以及联合顺铂和诺斯卡品应用48h后对SKOV3/DDP细胞形态的影响。4应用流式细胞术(flow cytometry FCM)分别测定单用顺铂、单用诺斯卡品以及联合后对SKOV3/DDP细胞凋亡和细胞周期的影响；5流式细胞术分别定量检测单用诺斯卡品组、单用顺铂组及顺铂联合诺斯卡品组干预SKOV3/DDP细胞48h后，细胞中NF-κB、MMP-9蛋白表达的变化。结果：1单独应用不同浓度诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞相同时间后，随着药物浓度的增高，抑制率相应增高。诺斯卡品0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L浓度组分别作用于SKOV3/DDP细胞24h后抑制率分别为1.33±0.42%、2.53±0.98%、5.21±1.25%、15.26±0.85%、22.21±2.73%、29.14±1.62%、37.33±3.48%、63.23±2.27%。诺斯卡品0.625μmol/L、1.25μmol/L组抑制率与空白对照组比较无明显差异（p﹥0.05），诺斯卡品2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L组抑制率与空白对照组比较差异均有统计学意义(p﹤0.05)。同一浓度的诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞，随着作用时间的延长，抑制率逐渐增大。诺斯卡品浓度为10μmol/L组分别作用24h、48h、72h后抑制率分别为22.21±2.73%、25.97±1.18%、31.54±3.17%，24h、48h、72h后抑制率与空白对照组比较均具有显著性差异(p﹤0.05)。诺斯卡品作用于SKOV3/DDP细胞24、48、72小时的IC50值分别为52.84μmol／L，28.04μmol／L，21.58μmol／L；IC10值分别为4.16μmol／L，3.09μmol／L，2.62μmol／L，表明诺斯卡品单独应用在一定浓度范围内能有效抑制人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP细胞增殖，并呈浓度及时间依赖性。诺斯卡品对SKOV3/DDP细胞作用24h后，10%的细胞生长受抑制所需要的药物浓度IC10为4.16μmol/L。根据文献，研究某种药物逆转耐药作用时的药物浓度一般选用略小于IC10的浓度，因此本实验选择1.25μmol/L进行实验。2MTT方法测定下列各组的IC50，分别设顺铂1mg／L、2mg／L、4mg／L、8mg／L、16mg／L组及顺铂各浓度组分别联合非细胞毒性剂量的诺斯卡品1.25μmol/L，作用于SKOV3/DDP细胞24h后，算得耐药细胞SKOV3/DDP对DDP的IC50从17.52mg／L降至12.68mg／L，耐药逆转倍数约为1.38倍，表明诺斯卡品可以部分逆转SKOV3/DDP细胞的耐药。3经过诺斯卡品1.25μmol／L、顺铂4mg／L及诺斯卡品1.25μmol／L联合顺铂4mg／L作用48h后，倒置显微镜下观察，空白对照组细胞排布紧密，贴壁生长，细胞菱形或多角形，细胞透明，生长状态良好，细胞间界限清楚，细胞核隐约可见；单用顺铂作用后可见到部分细胞皱缩，破裂，脱落呈悬浮状，细胞排布疏松；单用诺斯卡品作用后可见到少部分细胞皱缩，破裂，脱落呈悬浮状，细胞排布疏松；单用顺铂组较单用诺斯卡品组细胞形态学变化明显；诺斯卡品和顺铂联合作用后细胞破碎、形态不规则，零星贴壁，大部分细胞呈圆形、悬浮状，生长状态差，较单用诺斯卡品组、单用顺铂组细胞变化更明显。4流式细胞仪检测SKOV3/DDP在单用诺斯卡品（1.25μmol／L）组、单用顺铂（4mg／L）组及诺斯卡品（1.25μmol／L）联合顺铂（4mg／L）组干预下细胞周期及凋亡率变化4.1药物作用48h后，各组凋亡率分别为：对照组1.67±0.68%，诺斯卡品组2.77±0.56%，顺铂组8.12±0.89%，顺铂联合诺斯卡品组达到13.89±0.62%。单用顺铂组和联合组的凋亡率与对照组比较均有统计学差异(p﹤0.05)；联合组的凋亡率明显高于单用顺铂组，联合组与单用顺铂组相比凋亡率有显著性差异(p﹤0.05)，表明诺斯卡品可增强顺铂诱导肿瘤凋亡作用。4.2药物作用SKOV3/DDP细胞48h后，空白对照组细胞停滞在G0/Gl期、S期、G2/M期细胞数分别为62.31±2.84％、25.08±1.23％、12.61±1.17％；单用诺斯卡品组停滞在G0/Gl期、S期、G2/M期细胞数分别为52.16±3.83％、24.05±2.12％、23.79±1.11%；单用顺铂组停滞在G0/Gl期、S期、G2/M期细胞数分别为49.43±1.83％、39.78±1.45％、10.79±1.23％；诺斯卡品联合顺铂组停滞在G0/Gl期、S期、G2/M期细胞数分别为47.03±1.37％、31.16±1.98％、21.81±2.11%。单用诺斯卡品组和联合组与对照组比较差异均有统计学意义（p﹤0.05）。单用顺铂组与联合组相比差异有统计学意义（p﹤0.05），联合组停滞在G2/M期的细胞数明显高于单用顺铂组。实验表明，诺斯卡品可使SKOV3/DDP细胞周期停滞在G2/M期。5流式细胞仪检测单用诺斯卡品（1.25μmol／L）、单用顺铂（4mg／L）及诺斯卡品（1.25μmol／L）联合顺铂（4mg／L）分别作用于SKOV3/DDP细胞48h后，NF-κB、MMP-9蛋白的表达。NF-κB蛋白在单用顺铂组、单用诺斯卡品组和顺铂联合诺斯卡品组的FI值分别为0.994±0.007、0.860±0.010、0.842±0.020， NF-κB蛋白的表达各用药组与对照组相比均下降，其中单用顺铂组下降不明显，联合组下降最明显。进行统计学分析，比较各组NF-κB蛋白的FI值，单用顺铂组与对照组相比差异无统计学意义（p﹥0.05），单用诺斯卡品组和联合组与对照组比较差异均有统计学意义（p﹤0.05）。单用诺斯卡品组和联合组与单用顺铂组相比均有差别（p﹤0.05）；MMP-9蛋白在单用顺铂组、单用诺斯卡品组和顺铂联合诺斯卡品组的FI值分别为0.982±0.025、0.890±0.012、0.865±0.024，MMP-9蛋白的表达各用药组与对照组相比均下降，单用顺铂组MMP-9蛋白的表达稍有下降，联合组下降最明显。单用顺铂组与对照组比较，差异无统计学意义（p﹥0.05），单用诺斯卡品组和联合组与对照组比较差异均有统计学意义（p﹤0.05）。单用诺斯卡品组和联合组与单用顺铂组比较均有显著性差异（p﹤0.05）。结论：1应用一定浓度范围内的诺斯卡品可有效抑制卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP增殖，并呈时间及浓度依赖性。2诺斯卡品与顺铂对SKOV3/DDP细胞增殖抑制具有协同增效作用，诺斯卡品可增强顺铂对SKOV3/DDP细胞的诱导凋亡作用，并可逆转SKOV3/DDP细胞顺铂耐药。3诺斯卡品阻滞卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP于G2／M期，并可诱导该细胞凋亡。4诺斯卡品诱导SKOV3/DDP细胞凋亡、逆转耐药的作用机制可能与下调NF-κB蛋白、MMP-9蛋白有关。诺斯卡品为卵巢癌逆转耐药开辟了新思路。