碱性蛋白酶能够在碱性条件下保持良好的酶活力,在洗涤剂、皮革、纺织等领域有着广泛的应用。其中,2709碱性蛋白酶是工业中应用最广泛的一类蛋白酶,具有很强的分解蛋白质的能力,主要由地衣芽孢杆菌2709经深层发酵、提取及精制而成,但目前该酶产量较低,还不能满足现代工业发展的需求。本研究以地衣芽孢杆菌2709为出发菌株,通过紫外线诱变育种、基因表达调控元件（启动子）的筛选以及基因工程菌株的构建等方式提高其蛋白酶产量,并对2709碱性蛋白酶的酶学性质及应用性能进行了研究。具体研究内容主要包括如下几个方面:1、对地衣芽孢杆菌2709进行紫外诱变实验,通过对其生长曲线以及致死率曲线分析,获得最佳紫外照射时间为120 s,并由牛奶平板筛选获得透明圈直径与菌落直径比例最大的单菌落,对其进行遗传稳定性检测,结果显示所获菌株的碱性蛋白酶产酶活力由5036.3 U/mL提高到9186.6 U/mL且稳定遗传;2、启动子是微生物遗传系统中基因表达最重要的调控元件,本研究通过蛋白电泳及质谱检测的方法,由地衣芽孢杆菌11965基因组中筛选获得一种新型启动子pChi。进而以两种已知强组成型启动子pShuttle-09和pyxiE为对照,在枯草芽孢杆菌WB600中研究其对克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶与地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达活性。结果显示,启动子pChi的启动强度是pShuttle-09的1.25倍,pyxiE的2倍;3、使用穿梭载体pWH1520,以启动子pChi为表达调控元件,构建2709碱性蛋白酶同源表达载体,将其电转化转入地衣芽孢杆菌2709突变株中。发酵性能检测结果显示,重组基因工程菌的产酶活力达到12888.6 U/mL,比原始菌株提高了 155.9%;4、对2709碱性蛋白酶高产工程菌生产的碱性蛋白酶分离纯化后进行酶学性质检测,结果显示:该酶属于中温蛋白酶,最适反应温度为55℃,在低温条件下呈现良好的稳定性;最适反应pH为硼酸-氢氧化钠缓冲液pH 10.0,碱性条件下pH稳定性较好。在最适反应条件下,其对酪蛋白底物的米氏常数Km=7.14 mg/mL,最大催化反应速率Vmax=10.63 mg/（mL·min）,进一步的应用研究结果表明该酶作为洗涤剂添加剂具有良好的洗涤性能及稳定性。