HPLC法测定转化液中γ-氨基丁酸含量及转化液的预处理研究

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γ-氨基丁酸(GABA)转化液是以谷氨酸为底物,以含谷氨酸脱羧酶的微生物细胞为催化剂反应形成的多元混合体系。建立经济适用的获得高纯度GABA的后提取工艺,是关系到产品质量和市场竞争力的重要环节。GABA转化液成分复杂,因此,提高预处理效率是提高产品质量和降低成本的关键。本研究主要对GABA转化液的预处理进行研究,为后期的进一步提取和精制奠定基础,同时建立了一种定量分析GABA的方法。主要结果包括:1、结合GABA转化液特点,建立了以邻苯二甲醛为衍生剂的柱前衍生反相色谱法。色谱条件为Eclipse XDB-C18柱为分离柱,柱温27℃,检测波长338nm,梯度洗脱。结果表明,该方法线性范围为0.01mmol/L-10.00mmol/L, GABA出峰时间约为19.0min时,GABA与样品中含有的谷氨酸及其它杂质基本得到分离,而且乙醇和pH为3.0~8.0的转化液均不会对GABA定量分析造成显著影响。测得日内精密度和日间精密度的保留时间RSD分别为0.78%和0.72%,峰面积RSD分别为1.64%和1.24%。因此,该方法灵敏度高、重现性好,可用于转化液中GABA含量的测定。2、脱色研究表明,活性白土对GABA转化液的脱色效果较活性炭脱色好;最佳脱色条件为:活性白土加入量为2%,温度为40℃,脱色处理20min,转化液维持原始pH;色素去除率为65.32%。3、超滤研究表明,处理GABA转化液的最佳操作参数为:压差0.2MPa,转速65rpm,转化液维持原始pH。超滤对脱色后GABA转化液的蛋白去除率为88.37%,色素去除率为50.00%;随着浓缩比的增加,GABA回收率逐渐提高,最终回收率为90.76%。结果基本达到了利用超滤技术对转化液中GABA进行分离纯化的预期目标。
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