论文部分内容阅读
花粉发育不仅是植物有性生殖的关键环节,也关系着农业生产的诸多方面。在有性繁殖的蔬菜中,花粉发育的好坏决定着种子质量的优劣。对于以种子和果实为主要产品器官的蔬菜而言,其商品价值的实现依赖于花粉发育。在育种实践中,花粉发育还与雄性不育、自交不亲和等农艺性状密切相关。
长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一种大于200 nt,不具有编码潜能的RNA。已有研究证明lncRNA参与植物生长发育调控。在本实验室的前期研究中,对白菜核不育两用系‘Bcajh97-01A/B’的五级花蕾进行RNA-seq,鉴定出了一条在雄性不育系特异表达的长链非编码RNA——BrMYB80bSSLncRNA。该lnRNA位于转录因子BrMYB80两个拷贝其中的一个拷贝BrMYB80b所在的基因座上,而MYB80又是花粉发育四分体时期的关键调控因子。
本论文对BrMYB80bSSLncRNA在花粉发育过程是否具有功能进行了探究。首先通过cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了BrMYB80bSSLncRNA的全长,对其进行编码潜能分析,然后在菜心进行过表达载体的遗传转化来探究其在花粉发育过程中的功能,并对其功能发挥的形式进行推测。主要研究结果如下:
(1)通过实时定量RT-PCR(qRT-PCR)实验,验证了转录组测序发现的BrMYB80bSSLncRNA在‘Bcajh97-01A’系中特异表达的特点,也验证了MYB80在白菜中的两个拷贝BrMYB80a与BrMYB80b在‘Bcajh97-01A/B中的差异表达特征。
(2)通过RACE技术获得了BrMYB80bSSLncRNA的全长,同时发现BrMYB80b基因座存在多种正义链转录本的情况,对三种新发现的转录本进行编码潜能分析,明确BrMYB80bSSLncRNA是一条正义lncRNA。
(3)在菜心中过表达BrMYB80bSSLncRNA,发现转基因菜心会出现部分花粉有四个萌发沟的现象,但也有部分过表达植株未观察到该现象,推测可能是表达量未达到阈值造成的。在BrMYB80bSSLncRNA表达量最高的芽系中,约有15%的花粉存在着四个萌发沟。
(4)在BrMYB80bSSLncRNA高表达的转基因菜心中检测到BrMYB80b表达量的升高,据此推测BrMYB80bSSLncRNA可能通过调控BrMYB80b的表达来调控花粉萌发沟发育。
(5)通过CRISPR-cas9技术进行了BrMYB80a与BrMYB80b基因的定点敲除,但未获得BrMYB80a与BrMYB80b功能缺失的转基因菜心,推测现有载体在白菜中突变效率不高或不起作用,相关技术体系还有待优化。
长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是一种大于200 nt,不具有编码潜能的RNA。已有研究证明lncRNA参与植物生长发育调控。在本实验室的前期研究中,对白菜核不育两用系‘Bcajh97-01A/B’的五级花蕾进行RNA-seq,鉴定出了一条在雄性不育系特异表达的长链非编码RNA——BrMYB80bSSLncRNA。该lnRNA位于转录因子BrMYB80两个拷贝其中的一个拷贝BrMYB80b所在的基因座上,而MYB80又是花粉发育四分体时期的关键调控因子。
本论文对BrMYB80bSSLncRNA在花粉发育过程是否具有功能进行了探究。首先通过cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了BrMYB80bSSLncRNA的全长,对其进行编码潜能分析,然后在菜心进行过表达载体的遗传转化来探究其在花粉发育过程中的功能,并对其功能发挥的形式进行推测。主要研究结果如下:
(1)通过实时定量RT-PCR(qRT-PCR)实验,验证了转录组测序发现的BrMYB80bSSLncRNA在‘Bcajh97-01A’系中特异表达的特点,也验证了MYB80在白菜中的两个拷贝BrMYB80a与BrMYB80b在‘Bcajh97-01A/B中的差异表达特征。
(2)通过RACE技术获得了BrMYB80bSSLncRNA的全长,同时发现BrMYB80b基因座存在多种正义链转录本的情况,对三种新发现的转录本进行编码潜能分析,明确BrMYB80bSSLncRNA是一条正义lncRNA。
(3)在菜心中过表达BrMYB80bSSLncRNA,发现转基因菜心会出现部分花粉有四个萌发沟的现象,但也有部分过表达植株未观察到该现象,推测可能是表达量未达到阈值造成的。在BrMYB80bSSLncRNA表达量最高的芽系中,约有15%的花粉存在着四个萌发沟。
(4)在BrMYB80bSSLncRNA高表达的转基因菜心中检测到BrMYB80b表达量的升高,据此推测BrMYB80bSSLncRNA可能通过调控BrMYB80b的表达来调控花粉萌发沟发育。
(5)通过CRISPR-cas9技术进行了BrMYB80a与BrMYB80b基因的定点敲除,但未获得BrMYB80a与BrMYB80b功能缺失的转基因菜心,推测现有载体在白菜中突变效率不高或不起作用,相关技术体系还有待优化。