【摘 要】
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目的:迄今为止,自噬是否在甲亢性心肌肥大中发挥作用,以及自噬发挥作用是否通过miR-762靶向作用于Beclin-1都是未阐明的,本探究将致力于揭示这两个猜想,更重要的是这将帮助我们更好地了解甲亢性心肌肥大的分子机理。方法:在体内,T4组以1μg/g腹腔注射T4稀释液,对照组腹腔注射生理盐水150μl,7周后,麻醉后做心电图;ELISA检测血清中TT3、TT4浓度;HE和Masson染色观察心脏形
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目的:迄今为止,自噬是否在甲亢性心肌肥大中发挥作用,以及自噬发挥作用是否通过miR-762靶向作用于Beclin-1都是未阐明的,本探究将致力于揭示这两个猜想,更重要的是这将帮助我们更好地了解甲亢性心肌肥大的分子机理。方法:在体内,T4组以1μg/g腹腔注射T4稀释液,对照组腹腔注射生理盐水150μl,7周后,麻醉后做心电图;ELISA检测血清中TT3、TT4浓度;HE和Masson染色观察心脏形态学变化;RT-q PCR检测ANP、β-MHC和Beclin-1的表达水平;Western blot检测LC3、Beclin-1的表达水平;透视电镜观察自噬体数量;免疫荧光观察自噬体和自噬溶酶体数量;RT-q PCR检测miR-762的表达水平;双荧光素酶基因报告验证miR-762与Beclin-1的靶向关系;在体外,Control组用DMSO刺激原代心肌细胞24 h;T3组用T3稀释液刺激原代心肌细胞15nM 24 h;T3+miR-762mimic NC组是T3组转染miR-762 mimic NC 50nM 24 h;T3+miR-762mimic组是T3组转染miR-762 mimic 50nM 24 h;T3+miR-762 inhibitor NC组是T3组转染miR-762 inhibitor NC 50nM 24 h;T3+miR-762 inhibitor组是T3组转染miR-762 mimic 50nM 24 h,收样检测,数据都以均数±标准差表示（Mean±SD）,两组间比较用t检验,两组以上比较用方差分析,P＜0.05表示有统计学意义。结果:在体内,与对照组相比,T4组血清TT3、TT4和心率明显上调,心肌细胞表面积明显增加,结构紊乱并伴胶原纤维明显增生,ANP、β-MHC明显上调,LC3 II/LC3I、Beclin-1和自噬体数量明显上调,但miR-762明显下调。随后双荧光素酶基因报告实验提示Beclin-1是miR-762的靶基因。在体外,T3组的实验结果与T4组实验结果一致,此外,与T3组相比,T3+miR-762 mimic组的心肌肥大与自噬活性明显缓解,相反,T3+miR-762 inhibitor组的心肌肥大与自噬活性明显加剧。结论:miR-762通过抑制Beclin-1调控甲亢性心肌肥大。
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