白玉菇多糖的结构表征及免疫活性分析

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wojiushishashou47
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本研究以白玉菇子实体为原料,提取、分离纯化得到白玉菇多糖,并对其理化性质、结构表征及体内免疫调节活性进行了系统研究,旨在为天然免疫调节剂的研究和开发提供理论基础和试验依据,也为食用菌的利用拓展新的空间。主要研究结果归纳如下:采用水提醇沉法结合Sevage脱蛋白法从白玉菇子实体中获得白玉菇精多糖(RPHM),利用DEAE-Cellulose 52阴离子交换柱和Sepharose 4B柱进一步纯化得到中性白玉菇纯多糖P1、P2、P3和酸性白玉菇纯多糖P4,其中P1、P2和P3为白色絮状物,P4呈淡黄色絮状,得率分别为0.019%、0.042%、0.059%和0.334%。利用化学法对4种纯化多糖组分的化学组成进行分析,结果表明P1、P2、P3和P4的多糖含量分别为95.51%、93.68%、94.56%和94.11%;糖醛酸含量分别为1.24%、1.14%、0.85%和2.28%;P1、P2和P3中不含蛋白质,P4中只含有0.82%的蛋白质或糖蛋白;P1、P2和P3的硫酸基含量均较低,分别只有0.78%、0.96、1.15%,而P4中含量相对较高,达到1.69%;P1、P2、P3和P4中均检测不到总酚和总黄酮。红外光谱分析显示,4种多糖样品的糖残基环状构型均为吡喃型。通过HPLC法检测多糖的单糖组成,结果表明P1是以GLU为主要成分,并带有一定量ARA和GAL组成的杂多糖,P2是以GAL为主要成分并带有一定量的MAN和XYL组成的杂多糖,而P3和P4中都是以XYL为主要成分,还存在一定量GLU和少量GAL的杂多糖。利用刚果红实验分析了 4种多糖的高级结构,刚果红实验结果显示:P1中存在少量三股螺旋结构,而P2、P3和P4中均无此种构象;X-射线衍射结果均呈不规则弥散峰,表明多糖样品以无定型结构为主,分子规整性较弱;根据核磁共振波谱(1H NMR和13C NMR)的测试结果:P1为吡喃糖环结构,含有1,6-型糖苷键,主要是由α-构型并有较少量β-构型的糖残基所构成的多聚糖;P2为吡喃糖环结构,含有较多1,6-型糖苷键和较少的1,2-型、1,3-型、1,4-型糖苷键,且主要是由β-构型并有少量α-构型的糖残基所构成的多聚糖;P3为吡喃糖环结构,含有较多1,2-型、1,3-型、1,4-型、1,6-型糖苷键,且主要是由β-构型并有较少量α-构型的糖残基所构成的多聚糖;P4为吡喃糖环结构,含有较多的1,6-型糖苷键,且主要是由α-构型并有较少量β-构型的糖残基所构成的多聚糖。小鼠体内试验表明,连续14天灌胃的RPHM中、高剂量组(60、120 mg/kg bw/d)可提升免疫抑制型小鼠的免疫功能。主要表现为:可明显提升免疫抑制型小鼠的毛色、活动情况、身体状况、食欲等指标;可明显提升免疫抑制型小鼠的体重、脾脏指数和胸腺指数;可在一定程度上提高免疫抑制型小鼠IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平,并改善IL-6的分泌异常情况,使5种细胞因子指标趋于正常。可明显提升免疫抑制型小鼠对血液中碳粒的清除速率,提升单核-巨噬细胞吞噬功能;可明显提升免疫抑制型小鼠血液中白细胞、红细胞和血小板数量,提升骨髓造血功能;可明显改善免疫抑制型小鼠脾脏、胸腺的病变,改善结构完整度。
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