论文部分内容阅读
本文首先研究了库拉索芦荟(Aloevera[L.]Burm.f)细胞染色体的核型，对芦荟染色体类型按照Levan的分类方法进行分析。研究表明，库拉索芦荟染色体数为2n=14。染色体的核型为K(2n)=2x=6sm+6st+2m。其中第2，3，4对染色体为亚端部着丝粒染色体，第1，5，6对染色体为亚中部着丝粒染色体，第7对染色体为中部着丝粒染色体，在所有7对染色体中未观察到有携带随体的染色体存在，与前人报道的芦荟有两对长染色体带有随体的结果有所不同。本研究所进行的染色体核型分析有助于识别特定染色体，为特定染色体的分离奠定了基础。
本文还运用单染色体的微分离及杂交片段扩增技术首次分离了库拉索芦荟6号单染色体，并获得了该染色体的表达序列标签(ExpressedSequencedTags，ESTs)。运用微细玻璃针显微分离库拉索芦荟的单染色体，并根据上述核型分析的结果确定微分离染色体在库拉索芦荟的核型中属于第6号染色体。将微分离的库拉索芦荟6号染色体DNA及库拉索芦荟叶片的总eDNA分别用LA-PCR方法扩增，然后采用杂交片段扩增技术(HSA，hybridspecificamplification)，分离6号染色体中与cDNA同源的表达序列片段，并对表达序列片段进行微克隆，得到约40000个重组子。随机选取96个克隆进行分析，分别用DIG标记6号染色体的LA-PCR(linkeradaptorpolymerasechainreaction)产物和cDNA扩增产物作探针对其进行点杂交，对显示阳性信号的克隆进行测序。得到库拉索芦荟6号染色体的EST，将所得ESTs与GenBank中核苷酸进行比较，发现库拉索芦荟6号染色体的表达序列中有87.4％与植物的表达序列标签具有同源性，12.6％的ESTs与人或动物的表达序列标签具有较弱同源性。
在对ESTs的比对分析表明，与植物的表达序列具有较高同源性的ESTs中涉及到与不同植物种ESTs的相似性，涉及的范围是十分广泛的。如序列AE1与芦笋的表达序列标签有较高的同源性，序列AE2与水胁迫下的葡萄的表达序列标签有较高的同源性；序列AE5、AE6分别与向日葵、玉米的卵细胞的表达序列标签有高度同源性；序列AE7与柑橘的韧皮部的表达序列标签的同源性较高；序列AE8、AE9分别与菠萝在线虫病感染不同时期的表达序列标签具有较高的同源性；序列AE10与高粱的根茎及水胁迫条件下的表达序列标签具有极高的同源性；序列AE12与锈病感染的咖啡的表达序列标签的同源性极高；序列AE13与非生物素胁迫下的小麦的表达序列标签具有较高的同源性。
我们还将对阳性克隆继续进行测序，以研究其对农业生产有价值的基因和药物合成相关基因。其中将着重研究与芦笋的表达序列标签及非生物素胁迫下的小麦、咖啡、高粱、菠萝和水稻等作物的表达序列标签具有极高的同源性(＞93％)的课题。这些表达序列标签将对从库拉索芦荟中克隆有用的基因、以及对芦荟的分子遗传学研究非常重要。