【摘 要】
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目的:研究补肾益精法通过miR-26a调控的FLI1对硬皮病纤维化表观的影响及其表观遗传学机制,阐明补肾益精法治疗硬皮病的机理,为补肾益精法的临床应用提供有力依据,促进优秀中医治法的传承与创新;研究miR-26a在硬皮病纤维化机制中的作用,探索硬皮病治疗新的干预靶点,为现代硬皮病治疗提供新的思路与途径。方法:分离、培养来自系统性硬皮病患者皮损的成纤维细胞（SFB）和健康人的皮肤成纤维细胞（NFB）
【基金项目】
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国家自然科学基金委（项目编号81573976）； 广东省自然科学基金委（项目编号:2015A030313341）； 广东省科学技术厅（项目编号:2014A020221029）；
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目的:研究补肾益精法通过miR-26a调控的FLI1对硬皮病纤维化表观的影响及其表观遗传学机制,阐明补肾益精法治疗硬皮病的机理,为补肾益精法的临床应用提供有力依据,促进优秀中医治法的传承与创新;研究miR-26a在硬皮病纤维化机制中的作用,探索硬皮病治疗新的干预靶点,为现代硬皮病治疗提供新的思路与途径。方法:分离、培养来自系统性硬皮病患者皮损的成纤维细胞（SFB）和健康人的皮肤成纤维细胞（NFB）,采用miR-26a mimics和miR-26a inhibitor对SFB中的miR-26a表达进行调控,分别检测转染SFB前后各组miR-26a、FLI1、Collagen I、Fibronectin的表达。将所有成纤维细胞再分为6组,正常成纤维细胞为1组,加血清;硬皮病成纤维细胞分为5组,分别加血清、黄芪甲苷、软皮汤含药血清、软皮汤含药血清+miR-26a mimics、软皮汤含药血清+miR-26a inhibitor。检测各组miR-26a、FLI1、Collagen I,Fibronectin的表达。结果:1.成功建立硬皮病与正常人皮肤成纤维细胞系,并用免疫细胞化学法鉴定其均为成纤维细胞:CK（-）,Vimentin（+）;2.与NFB相比,SFB中miR-26a过表达,FLI1低表达,差异具有统计学意义（P<0.05）;3.与对照SFB相比,在SFB中转染miR-26a mimics、inhibitor后,分别出现miR-26a过表达、FLI1低表达、Collagen I和Fibronectin表达增多;miR-26a低表达、FLI1高表达、Collagen I和Fibronectin表达下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;4.与NFB相比,SFB中FLI1表达下调,Collagen I和Fibronectin的表达上调;加入药物（黄芪甲苷与软皮汤含药血清）处理SFB细胞后,FLI1表达上调,Collagen I和Fibronectin表达下调;与SFB比,加入miR-26a inhibitor和软皮汤含药血清后,FLI1表达上调,Collagen I和Fibronectin表达下调;与SFB比,加入miR-26a mimics软皮汤含药血清后,FLI1表达无明显差异,Collagen I和Fibronectin表达下调。结论:在硬皮病成纤维细胞中,过表达的miR-26a可能通过下调FLI1的表达,促进纤维化的发生,补肾益精法可能通过下调过表达的miR-26a,上调FLI1的表达而发挥抑制纤维化的作用。
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