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表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor，EGFR）是酪氨酸受体家族ErbB中重要成员之一，参与细胞增殖、迁移和分化等过程。本研究以奶山羊乳腺上皮原代细胞为试验材料，过表达EGFR基因并检测对细胞增殖活性的影响；添加EGF以及EGFR信号通路相关蛋白的抑制剂，检测EGFR对细胞增殖的影响、同时检测Akt以及ERK1/2信号通路的激活情况以及细胞周期蛋白的变化。获得的主要研究成果如下： （1）通过对奶山羊乳腺上皮原代细胞中进行不同浓度的EGF（0，12.5，25，50，100ng/ml）处理，得到适宜乳腺上皮细胞中生长的浓度，结果显示12.5~50ng/mL EGF可以促进乳腺上皮细胞的增殖。使用不同浓度AG1478处理奶山羊乳腺上皮细胞，10μmol/L的AG1478可以显著降低细胞增殖活性。成功地将pcDNA3.1-EGFR真核表达载体转染于山羊原代乳腺上皮细胞，RT-qPCR结果显示EGFR基因的mRNA水平上调25倍以上；WB结果显示，过表达EGFR基因与EGF（50ng/mL）共同处理后，EGFR蛋白的磷酸化水平显著增加（P<0.01）。Hoechst/PI染色结果表明，对过表达EGFR的山羊乳腺上皮细胞进行EGF处理后，细胞数量明显增加；AG1478（10μmol/L）处理使细胞数目明显减少，细胞存活能力明显降低(P<0.01)。流式细胞仪检测发现，EGF（50ng/mL）增加了S期与G2期的细胞比例，AG1478使细胞周期阻滞在G1期，说明EGF对细胞周期的促进作用与EGFR活化关系密切。 （2）血清饥饿16h后，EGF（50ng/mL）刺激乳腺上皮细胞，EGFR磷酸化水平随EGF处理时间延长而显著增加，ERK1/2和AKT磷酸化明显上升。EGFR抑制剂AG1478（10μmol/L）处理乳腺上皮细胞1h后，EGF（50ng/mL）介导的AKT、ERK1/2的磷酸化水平都显著降低。山羊乳腺上皮细胞中添加10μmol/L AG1478或10μmol/L Gefitinib24h后发现，P21蛋白水平明显上升，细胞周期蛋白Cyclin E1以及周期蛋白激酶CDK2蛋白水平显著下降。EGF处理乳腺上皮细胞后周期蛋白激酶CDK2表达明显增加；与EGF组相比，500nmol/ml MK2206及1μmol/ml U0126处理乳腺上皮细胞24h后，CDK2表达降低，说明EGFR通过下游AKT以及ERK1/2信号蛋白可调控CDK2的表达。 综上所述，本试验初步研究了EGFR信号通路在奶山羊乳腺上皮细胞中的作用。通过添加EGF以及EGFR抑制剂，证明了EGFR对奶山羊乳腺上皮细胞增殖具有促进作用，ERK1/2和AKT信号通路可显著调控CDK2激酶的表达，为明确EGFR信号通路在奶山羊乳腺发育中的作用提供了理论依据。