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背景与目的：食管癌是我国常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率都比较高。在对其进行以顺铂（cDDP）为主的联合化疗时，常发生肿瘤对化疗药物耐受，从而影响治疗效果。探明肿瘤对顺铂耐药的机制，对于增强化疗的作用，提高患者的生存率，有着重要的意义。由于顺铂是细胞毒性药物，进入细胞后其作用靶点是细胞DNA，可与DNA形成链内交联及链间交联，抑制DNA复制和RNA转录，将细胞阻滞于G2期或引起程序性细胞死亡。顺铂的耐药性产生涉及细胞的多种生化改变，近年来，对耐药机制研究的重点主要放在DNA修复增强和对顺铂形成的加成物耐受上。 DNA聚合酶β（pol β）是一种看家基因，从酵母到哺乳动物中高度保守。在短补丁碱基切除修复（BER）中起了重要作用。然而近年来越来越多的证据表明，pol β还能参与更广泛的细胞反应。不少研究发现pol β可能参与了长补丁碱基切除修复，基因组DNA复制，DNA重组以及跨损伤DNA合成。在结肠癌，乳腺癌和前列腺癌中，pol β明显增高；在包括白血病、卵巢癌和结肠癌在内的某些对顺铂有耐药性的肿瘤细胞株中，pol β的mRNA都是增加的。出现这些情况的原因可能在于pol β的表达升高，将干扰或取代细胞内其它聚合酶的正常功能。而且pol β是一个错误倾向的聚合酶，其复制保真度低，故pol β扩张的功能可能导致遗传不稳定及化疗耐药的发生。本实验的目的：（1）采用大剂量顺铂（10 μg／ml）反复间歇24h暴露法，以食管癌鳞状上皮细胞株ECa109为基础，建立起顺铂耐药细胞株ECa109／cDDP，为进一步研究打好基础。（2）检测比较ECa109细胞与ECa109／cDDP细胞生物学特性之间的区别，以及pol β表达水平的不同，以探讨pol β表达增高与郑州大学硕L研究生毕业论文食管癌中DNA聚合酶p蛋白表达增加与对顺铂产生耐药性之间的关系J顷铂耐药性产生之间的关系。 材料与方法 以食管癌上皮细胞ECal09为模型，在含10%胎牛血清的DMEM培养液中，37℃，5%COZ培养。以临床食管鳞癌化疗用药的最低计量换算终浓度，采用大剂量顺铂（10p留ml）反复间歇24h暴露法，ECal09细胞中建立起顺铂耐药细胞株ECa109/eDDP;MTT法测定顺铂对ECal09/eDDP和ECa109两种细胞的抑制率，分别计算出ICS。，求得耐药系数。采用细胞计数法记录两种细胞增长情况，绘制生长曲线，计算出肿瘤细胞群体倍增时间。并在倒置显微镜下观察两种细胞形态变化，流式细胞仪检测两种细胞的周期分布，提取两种细胞的核蛋白，用Westem蛋白电泳测定两种细胞内的DNApolp表达水平。将分别转染58bP缺失型polp质粒和野生型polp质粒的CHO细胞与转染空质粒的CHo细胞用MTT法测定顺铂对这三种细胞的抑制率，计算出IC50。 结果 （l）ECal09/eDDP细胞对顺铂的耐药指数为1.57。ECa109/eDDP细胞的增殖速度比ECalog细胞略增快（p<0.01）。光学显微镜下ECaz09/enDP及Eealog均呈上皮样单层排列，细胞大小不一，为多角形;ECal09细胞边界清楚，核大，圆形或椭圆形;ECal 09/cDDP细胞边界不清，核大，不规则，细胞体积略增大，部分细胞变形并有巨细胞产生。ECal09/eDDP及ECal09细胞周期分布差异显著，ECa109/eDDP细胞Go/GI期比例减少（p<0.01），S期比例增加（P<0.01）。（2）ECa109/eDDP细胞内polp蛋白表达水平比ECalog细胞高（p<0.01）。（3）顺铂对于转染野生型polp质粒的CHo细胞的ICS。小于转染空质粒的CHO细胞（p<0.01）;转染58bP缺失型pol旦质粒细胞的ICS。大于转染野生型polp质粒和转染空质粒的cHo细胞 （P<0 .01）。 结论 （1）本实验中建立的ECal Og/cDDP细胞株具有耐药表型，且有和ECal09不同的生物学特性。（2） ECalOg/cDDP对顺铂耐药性增强可能与细胞内DNA聚合酶p蛋白表达增加，从而引起DNA修复能力增强以及对于顺铂加成物形成耐受有关。（3）由于DNA聚合酶日具有错误倾向，这种增加表达的聚合酶日极有可能产生了郑州大学硕上研究生毕业论文食管癌中DNA聚合酶日蛋自表达增加与对顺铂产生耐药性之间的关系突变。