棉花黄萎病是一种危害严重的世界性病害,目前已遍布世界30多个国家和地区,已成为严重影响世界各主产棉国棉花高产稳产的主要障碍。为了控制棉花黄萎病,减少其带来的经济损失,建立对其方便快捷、切实有效的检测方法,本实验室利用棉花黄萎菌的菌丝蛋白作为抗原免疫家兔,制备了该病原菌的多克隆抗体,通过对3只不同家兔个体免疫产生的抗体进行筛选,选择出效价最高的抗体,测定其特异性,并以此抗体进行了抗体、羊抗兔抗体在间接ELISA检测实验中最适反应浓度的筛选,并最终确定以抗体工作浓度1：2000,羊抗兔抗体工作浓度1：500建立特异性检测棉花黄萎病菌的间接ELISA方法,该方法检测灵敏度达到5ng/mL棉花黄萎菌菌丝蛋白。本实验所制备的多克隆抗体经过Protein-A柱纯化，特异性较好,效价可达1：64000。将此多克隆抗体进行生物素标记,并进行了初步的双抗夹心ELISA实验。应用间接ELISA方法检测棉花组织及其根部土壤中棉花黄萎菌的含量,发现病株的茎、根及根部土壤的带菌量多少与病株发病程度有一定的相关性；检测发病棉株枝头花和落地花黄萎病菌的含量,结果枝头花的带菌量稍高于落地花。当将此抗体用于温室栽种的棉花幼苗检测时,发现未接种棉花黄萎菌的幼苗组织检测结果有一定的假阳性反应,但接种黄萎菌的幼苗组织检测的OD值仍高于未接种的幼苗。本研究说明,该方法在棉花黄萎病的早期检测和预报上具有重要的应用前景。