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子宫内膜异位症(endometriosis,EM),是子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞种植于子宫以外的一种雌激素依赖性疾病。EM在育龄期妇女中发病率高达10%~15%,与不孕症高度相关。与其他不孕症的患者相比,EM性不孕症患者促排卵后正常获卵率相对较低,其采用辅助生殖技术后的妊娠结局也相对较差,可能与卵泡成熟障碍、卵母细胞质量受损等因素相关。卵泡液包围卵母细胞并构成排卵前的微环境,必然对卵母细胞的成熟过程和质量造成影响。已有研究表明EM性不孕症患者卵泡液中多种蛋白表达出现异常,还有研究者对具体异常表达的蛋白进行了研究,他们认为这有可能是除EM导致盆腔解剖结构紊乱以外导致不孕症发生的重要因素。中药内异方是临床治疗EM和EM性不孕症的有效中药复方。本实验旨在研究EM性不孕症患者卵泡液对小鼠卵母细胞成熟和质量的影响及机制,筛查并验证EM性不孕症患者卵泡液中明显表达异常的细胞因子和蛋白质,探讨中药内异方对EM性不孕症患者卵泡液影响小鼠卵母细胞成熟的干预作用,为EM性不孕症的理论研究和临床治疗提供新的思路和方法。研究目的1、了解EM性不孕症患者卵泡液对小鼠卵母细胞成熟和质量的影响,并探讨其机制。2、发现EM性不孕症患者卵泡液中表达明显异常的细胞因子和蛋白质。3、了解中药内异方药物血清对EM性不孕症患者卵泡液影响小鼠卵母细胞成熟的干预作用。研究方法1、通过在小鼠卵母细胞体外成熟的培养液加入EM性不孕症患者卵泡液,观察EM性不孕症患者卵泡液对小鼠卵母细胞成熟的阻碍作用;通过对成熟卵母细胞中纺锤体的荧光染色及形态观察,了解EM性不孕症患者卵泡液对小鼠卵母细胞质量的影响;通过检测EM性不孕症患者卵泡液参与体外培养的卵母细胞中氧化应激的水平,了解EM性不孕症患者卵泡液影响小鼠卵母细胞成熟和质量的部分机制。2、通过对EM性不孕症患者卵泡液的蛋白芯片检测,筛查出表达异常(差异2倍或以上)细胞因子和蛋白;选择其中与EM相关的细胞因子和蛋白,扩大样本进行ELISA方法检测并验证。3、在EM性不孕症患者卵泡液参与小鼠卵母细胞体外成熟培养的基础上,加入中药内异方药物血清参与培养,了解中药内异方药物血清对EM性不孕症患者卵泡液影响小鼠卵母细胞成熟的干预作用。研究结果1、EM性不孕症患者卵泡液降低了小鼠卵母细胞体外成熟率,损伤卵母细胞纺锤体,增强细胞内氧化应激水平。2、EM性不孕症患者卵泡液中ICAM-1表达明显增多(P<0.001),TECK表达明显降低(P<0.001);I-309、Lymphotactin(XCL1)、MMP-25、TSG-6等多种蛋白异常表达。3、中药内异方药物血清能提高EM性不孕症患者卵泡液降低的小鼠卵母细胞体外成熟率。结论1、子宫内膜异位症性不孕症患者卵泡液增强小鼠卵母细胞内的氧化应激水平,阻碍其体外成熟。2、子宫内膜异位症性不孕症患者卵泡液中ICAM-1过量表达,或同时存在多种细胞因子和蛋白质异常表达,造成了卵泡液微环境异常。3、中药内异方药物血清能改善子宫内膜异位症性不孕症患者卵泡液对小鼠卵母细胞体外成熟的阻碍作用。