【摘 要】
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目的:探讨survivin反义寡核苷酸对人胃癌原代细胞凋亡的影响,为胃癌的靶向治疗提供实验依据。 方法:人胃癌实体瘤新鲜标本,剪切为1mm大小的组织块,用鼠尾胶原为生长介质,RPMI
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目的:探讨survivin反义寡核苷酸对人胃癌原代细胞凋亡的影响,为胃癌的靶向治疗提供实验依据。
方法:人胃癌实体瘤新鲜标本,剪切为1mm<3>大小的组织块,用鼠尾胶原为生长介质,RPMI 1640为基础培养液进行培养。收集培养至第3代的胃癌原代细胞,分为4组:空白对照组,脂质体组,正义寡核苷酸组,反义寡核苷酸转染组。人工合成的survivin反义寡核苷酸用脂质体介导转染胃癌原代细胞,48小时后,用倒置显微镜观察肿瘤细胞的形态改变,Western blot检测survivin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫细胞化学法显示各组肿瘤细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,并对结果进行统计学分析。
结果:用脂质体介导survivin反义寡核苷酸(survivin-ASODN)转染胃癌原代细胞,48小时后,肿瘤细胞体积变小,核固缩模糊,细胞碎裂;Western blot检测到survivin蛋白量下降;流式细胞仪观察到肿瘤细胞DNA主峰左侧出现了凋亡峰,肿瘤细胞的凋亡率增高;免疫细胞化学显示PCNA表达率下降。Survivin反义寡核苷酸组肿瘤细胞survivin蛋白的表达量,肿瘤细胞的凋亡率以及肿瘤细胞PCNA的表达率,与其他各组相比,其差异有统计学意义(P<0.05),而空白对照组、脂质体组、正义寡核苷酸组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:survivin反义寡核苷酸在脂质体包裹介导下转染人胃癌原代细胞,可以诱导肿瘤细胞发生凋亡,抑制细胞生长,为胃癌的靶向治疗提供了实验依据。转染胃癌原代细胞较转染胃癌细胞系实验进一步验证了survivin作为抗癌治疗标靶的可靠性。
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