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启动子是基因工程中的一把关键的钥匙,它能够决定外源基因的转录方式,选择合适的启动子调控不同外源基因的表达在生物学研究中具有重要作用。组织特异性启动子能驱动外源基因在特定的部位高效表达,同时还能避免组成型启动子带来的营养浪费等缺陷。发掘合适高效的组织特异型启动子及其顺式作用元件的解析是启动子研究工作中的重点。前期本实验室从W38型烟草中克隆得到了sm-Nvas启动子区域的序列,生物信息学分析及转基因实验证实该启动子与维管束发育相关。本研究旨在分析sm-Nvas启动子的驱动活性,鉴定sm-Nvas启动子的顺式作用元件,发掘新的组织特异型高效启动子。本研究取得的结果主要有:(1)对sm-Nvas启动子进行5’端缺失分析,以起始密码ATG中的A为+1位点,将sm-Nvas启动子-799区域分为20个长度不同的5’端缺失片段,并替换p CAMBIA1301、p CAMBIA1302的35S启动子与报告基因融合,共构建20个5’端缺失片段-GUS重组载体和20个5’端缺失片段-GFP重组载体。通过农杆菌介导法分别将这40个重组载体遗传转化至W38型烟草中,得到阳性转基因烟草植株。(2)完成GUS组织化学染色及GFP荧光观察,结果进一步证实sm-Nvas启动子属于组织特异型启动子。所有得到的转基因植株均能检测到报告基因的表达,sm-Nvas启动子-216区域足以驱动外源基因在维管束组织中表达,-216区域内存在启动子核心元件和维管束组织特异表达元件。(3)报告基因表达量结果显示sm-Nvas启动子驱动活性远高于35S启动子,是一个维管束组织特异型强启动子。-402～-640区域表达量显著增高,且-640区域驱动活性最高,表明-402～-337区域存在一个能上调启动子活性的元件。-680～-640区域存在一个能下调启动子活性的元件,与上调启动子活性的元件相互拮抗。