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本研究通过透射电镜观察和RT-PCR扩增技术对辽宁四种植物样品中病毒进行了鉴定。确定侵染南瓜、臭椿、龙葵和番茄的病毒均属马铃薯Y病毒科的马铃薯Y病毒属,分别为小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)。本研究丰富了辽宁地区植物病毒资源,为植物病毒防治工作奠定理论基础。(1)小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV):从辽宁省沈阳市和盖州市分别采集表现花叶的南瓜样品,经透射电镜负染色实验,观察到典型Potyvirus线性粒子。利用Potyvirus通用引物PVY-Legpoty-F/R分别对3个沈阳样品和3个盖州样品进行RT-PCR扩增,得到预期片段,克隆并测序。Blast比对结果表明,3个沈阳样品及3个盖州样品之间,同ZYMV的同源性高达99%。利用已经报道的特异引物ZYMV-CP-F/R从6个样本中扩增到约1.2kb的ZYMV片段片段包含完整的外壳蛋白基因(coat protein,cp)。基于cp的核苷酸同源性进行序列分析,得出ZYMV辽宁沈阳分离物、ZYMV-LNgz同山西ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14](KP742962)同源性最高,达99.1%和99.4%。系统进化树分析表明2个ZYMV辽宁分离物与山西分离物ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14]聚集在一个分支,推测ZYMV-辽宁分离物与山西分离物亲缘关系最近,证明该地区南瓜花叶病病原为ZYMV。(2)西瓜花叶病毒(WMV):2016年8月,在辽宁省盖州市采集到表现花叶的臭椿样品。透射电镜负染色观察到病中存在800nm×18nm的线性病毒粒子。病叶超薄切片结果显示具有大量囊泡和线性聚集体。利用PVY-Legpoty-F/R分别对3个辽宁盖州臭椿花叶样品进行RT-PCR扩增并得到750bp阳性片段。经Blast搜索,与西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)高度同源。利用WMV-5NF/WMV-5NR、WMV-MNF/WMV-MNR和WMV-3NF/WMV-3NR三对引物扩增WMV全基因组,测序为10070核苷酸(MF418043),可切割成10个成熟蛋白。基于cp基因氨基酸序列进行同源性分析,发现盖州臭椿分离物与北京臭椿分离物同源性最高,为93.3%。系统进化树分析,显示WMV辽宁臭椿分离物与已经报道的WMV分离物聚类在一个分支。这是辽宁臭椿上WMV分子特征的首次报道。(3)辣椒脉斑驳病毒(ChiVMV):2016年10月,在辽宁沈阳采集到黄斑驳症状的龙葵样品。利用PVY-Legpoty-F/M4经PCR扩增得到737bp阳性片段,测序确定为ChiVMV病毒。利用ChiVMV特异性引物ChiVMV-CP-F/ChiVMV-CP-R对龙葵黄斑驳样品cDNA进行扩增,得到1103阳性片段,包含完整的cp基因,cp序列大小为863bp,编码287个氨基酸。基于ChiVMV-cp基因进行同源比对,ChiVMV-LNsy-Longkui分离物cp与中国四川番茄分离物(ChiVMV-[CN:SC:CD:Lycopersicon esculentum:13],KF738253)同源性最高,为98.6%。该病毒首次在龙葵上被发现。(4)马铃薯Y病毒(PVY)2015年8月,在辽宁盖州采集表现黄化症状的番茄样品。利用PVY-Legpoty-F/R对提纯的RNA样品合成的cDNA进行PCR扩增,获得约750bp基因组片段。分子克隆后送出测序,结果表明该片段实际大小为675bp。同源性分析结果显示,该片段与马铃薯Y病毒(PVY)同源性最高。确定番茄黄化样品的病原是PVY辽宁分离物。