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油茶(Camellia oleifera)是我国重要的油料作物,茶油中的不饱和脂肪酸、茶多糖和微量物质能预防人体多种疾病,具有很高的经济价值。随着油茶产业的不断发展,油茶病虫害日趋严重,其中油茶炭疽病(Camellia oleifera anthracnose)是油茶产区的主要病害之一,严重影响了油茶的产量与质量。当前化学农药的泛滥使用,造成环境污染、农药残留、生态破坏和茶油品质下降等一系列问题,因此,油茶病虫害的高效、安全、绿色生物防控成为当前研究热点。本实验室筛选出一株对油茶炭疽病有很强抑制作用的油茶拮抗放线菌CF17,为了更好的为生防菌株CF17林间应用提供奠定理论基础,本论文主要以放线菌CF17发酵液为研究对象,研究了其抑菌谱,并采用丙酮沉淀法、SPE固相萃取法、高效液相色谱法和质谱法对油茶炭疽病拮抗放线菌CF17抑菌物质进行分离纯化及鉴定。研究主要结果如下:(1)油茶炭疽病拮抗放线菌CF17抑菌物质分离。放线菌CF17进行液体发酵得到CF17发酵液,对发酵液进行抑菌谱测定发现,放线菌CF17对炭疽属病原菌抑菌率达到90%以上,具有用于生物农药开发的前景。对CF17无菌发酵液通过乙醇沉淀法、乙酸乙酯沉淀法、丙酮沉淀法进行抑菌物质活性对比,筛选出丙酮沉淀方法为最佳提取方法。通过设置30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同丙酮浓度提取发酵液进行抑菌实验,筛选出50%的丙酮浓度为最佳提取浓度,其抑菌圈达到19.50mm,并能很好的分离发酵液中的杂质。(2)油茶炭疽病拮抗放线菌CF17抑菌物质纯化。对CF17抑菌粗提物进行固相萃取分离纯化,以乙腈为洗脱液,设置0%、10%、60%、100%不同浓度的乙腈洗脱萃取柱,经过抑菌实验结果表明CF17抑菌物质全部存在于60%的洗脱液中。对经固相萃取后的抑菌物质进行半制备高效液相色谱纯化,按时间段收集到11个组分,抑菌实验结果表明仅只有6号(25-30min)组分能产生明显抑菌圈;根据液相色潜峰强度收集到23个组分并进行抑菌实验,结果表明仅15号组分色谱峰保留时间27.21min处能产生明显抑菌圈,抑菌圈大小为19.55mm,与分时间段收集组分抑菌实验相符。优化后的色谱条件分析色谱峰保留时间17.2min处组分,结果表明17.21min处组分主要存在两种抑菌物质,分别为保留时问32.58min处抑菌物质与保留时间37.51min处抑菌物质,且色谱峰纯度达到质谱检测要求。(3)油茶炭疽病拮抗放线菌CF17抑菌物质鉴定。通过离子阱质谱对放线菌CF17抑菌物质进行结构解析,通过一级二级质谱进行分析,并通过与质谱数据库比对,鉴定CF17抑菌物质结构。保留时间32.58min处抑菌物质通过离子阱质谱推断为Tetrin B,分子式为C34H51NO14;保留时间37.51min处抑菌物质为Tetramycin A,分子式为C35H53NO13。放线菌CF17所产生抑菌物质是一类四烯大环内酯类的抗生素,它不仅对大多数真菌性病害有抑制作用,而且能通过提高植株生长素与防御酶活性,促进植株生长,提升植株抗病能力。