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阿尔茨海默病(Alzheimer’s diseases, AD)是一种缓慢发展的临床上以进行性的认知损害、记忆缺失和人格改变为特征的神经退行性疾病,其与大脑及神经组织中异常的胆固醇代谢有关。24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)是人体合成胆固醇最终阶段的酶,能够催化链甾醇还原为胆固醇。阿尔茨海默病相关蛋白24-脱氢胆固醇还原酶(DHCR24)是一个广泛表达的,兼具胆固醇合成功能以及抗细胞凋亡等多样化生理功能的蛋白,其神经细胞保护作用得到公认,但其在信号转导通路中的位置和功能尚未明确。为高通量筛选与DHCR24有相互作用的蛋白质,进一步揭示DHCR24影响细胞命运的分子机制,本次实验拟体外表达并纯化获得人源DHCR24蛋白,并在此基础上联合采用以DHCR24蛋白为诱饵的免疫共沉淀联合质谱分析技术及人脑cDNA文库T7噬菌体展示技术,初步筛选与DHCR24发生相互作用的候选蛋白。首先,我们以质粒pcDNA3.1a-DHCR24和pT7CFE1-CHis为原料构建质粒PT7CFE1-HIS-DHCR24,通过蛋白体外表达系统得到过表达的DHCR24蛋白。利用免疫沉淀技术用已知可以和DHCR24相互作用的MDM2蛋白验证体外表达的DHCR24的功能；DHCR24功能得到确认后,进行免疫共沉淀联合蛋白质谱实验并进行分析,得到了部分可能与DHCR24相互作用的候选蛋白质。另外,我们再以体外表达得到的DHCR24进行蛋白包被,使用人脑cDNA文库T7噬菌体展示技术,筛选与DHCR24相互作用的蛋白质。将两部分得到的数据进行综合分析,确定与DHCR24存在相互作用的候选蛋白质。综上所述,本论文以pT7CFEl-HIS-DHCR24重组质粒的DHCR24蛋白体外蛋白表达及纯化为基础,证明重组质粒体外过表达的DHCR24具有良好的与其相互作用蛋白结合活性,并进行了以DHCR24蛋白为诱饵蛋白的免疫沉淀联合质谱分析筛选DHCR24互作候选蛋白和噬菌体展示实验并初步确定了与DHCR24相互作用的候选蛋白,为进一步研究DHCR24相互作用蛋白并理解DHCR24的神经保护作用的机制奠定了基础。