苎麻微卫星的分离与鉴定及其在苎麻组亲缘关系研究中的应用

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本研究采用RAPD富集法与探针杂交富集法首次分离了31个苎麻微卫星序列,建立了以探针杂交富集法分离苎麻微卫星的方法。利用Net Primer与Primer 3等软件设计了31对苎麻微卫星引物,并获得了苎麻SSR最佳反应体系,利用筛选得到的苎麻微卫星引物研究了苎麻组亲缘关系。 主要结果如下: 1) 以PIMA法在苎麻RAPD富集微卫星文库中快速筛选250个重组阳性克隆,对26个可能含有微卫星的阳性克隆进行测序,获得了13个苎麻微卫星序列,这些序列已在GenBank中登录。 2) 第二种方法以PCR方法从探针杂交富集微卫星文库中筛选了36个阳性克隆,对22个可能含有微卫星的阳性克隆进行测序,最后获得了18个苎麻微卫星序列。探针杂交富集法除了有着RAPD富集法的优点外还有着目的性强、分离效率高(61.1%)、分离重复片段长(19.2)等优点,为进一步从苎麻中分离大量的微卫星提供了可靠的实验方法。 3) 获得了苎麻SSR最佳反应体系:25μlSSR反应总体积中,模板量为50ng;Mg2+浓度为1.5mmol/L;dNTPs浓度为0.10mmol/L;引物浓度为0.2μmol/L;Taq酶用量为1U;从筛选得到的24对苎麻微卫星引物中挑选出9引物研究苎麻组亲缘关系。结果表明,微绿苎麻处于最低的位置,青叶苎麻次之,贴毛苎麻和苎麻处于最高位置,并具有同等的分类地位。
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