【摘 要】
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头孢菌素C是由顶头孢霉产生的一类β-内酰胺类抗生素,经过化学或二步酶解法裂解生成的7-ACA是一系列半合成头孢菌素类抗生素的重要生产原料。随着市场竞争激烈程度的增加,高产
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头孢菌素C是由顶头孢霉产生的一类β-内酰胺类抗生素,经过化学或二步酶解法裂解生成的7-ACA是一系列半合成头孢菌素类抗生素的重要生产原料。随着市场竞争激烈程度的增加,高产且低成本的头孢菌素C将更具有市场竞争力。
本研究的目的在于:通过紫外线诱变结合终产物抗性筛选得到产头孢菌素C的优良菌株;另外将透明颤菌血红蛋白(vgb)基因转化头孢菌素C产生菌顶头孢霉,提高顶头孢霉的摄氧效率、改善其生长状况,以期提高头孢菌素C的产量,降低生产成本。
通过自然选育,筛选得到1株头孢菌素C产量稳定的菌株:CephalosporiumacremoniumNS-1,其CPC效价为4443.61μgml/L;以CephalosporiumacremoniumNS-1为出发菌株,经过紫外线诱变处理,筛选得到头孢菌素C高产菌株CephalosporiumacremoniumUV-21,CPC效价为5643.52μgml/L;菌株CephalosporiumacremoniumUV-21经过终产物抗性筛选,得到终产物抗性突变菌株CephalosporiumacremoniumRM-8,CPC效价为6443.22μgml/L,较出发菌株CephalosporiumacremoniumNS-1产CPC能力提高45%。
采用原生质体/PEG/CaCl2法将质粒pSY090513-vgb转化顶头孢霉,利用博莱霉素抗性筛选转化子。CO结合差光谱法分析结果表明:转化子细胞抽提物在420nm处有一吸收峰,说明转化子细胞中表达了透明颤菌血红蛋白,并且具有生物活性。采用二级发酵法,将顶头孢霉(含或不含vgb基因)经种子瓶培养72h后,以10%(v/v)的接种量转发酵摇瓶,7d后取出测定效价,发酵结果表明,转化子的效价较RM-8(vgb-)没有明显提高,可能是由于目的片段随机整合到顶头孢霉基因组中,导致产CPC能力没有明显提高。
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