研究背景：　　研究显示，我国人口老龄化日益严重，目前60岁以上的人口已超过2.2亿，老年人群中慢性难愈合创面的发生率约占1%~2%，严重影响患者的生活质量，给患者身心带来极大痛苦，也给家庭和社会带来沉重负担。近年来，研究发现血小板凝胶（PG）对慢性难愈合创面有较好的促进愈合作用，其有效作用物质主要是丰富的生长因子、抗菌肽和组织因子等多种生物活性蛋白。然而，传统PG的应用存在一定的缺陷，如PG降解较快、保存时间短、换药频率高、不能常温保存，更不能实现产业化。为克服PG应用的不足，国外研究人员将PG上清液与其他生物材料联合应用以提高其应用价值。明胶微球是一种良好的缓释载体。将PG上清液与明胶微球联合制备成缓释冻干制品的研究国内未见报道，因此提出本课题的研究。　　研究目的：　　制备一种载PG上清明胶缓释微球冻干制品，用于慢性难愈合创面的治疗。　　研究方法：　　1.PG上清液的制备：首先采集志愿者的全血分离制备富血小板血浆（PRP），用凝血酶和Ca2+激活PRP，设置不同激活时间点（15min、30min、45min、1h、6h、1d、3d、5d、7d）制备PG上清，以PDGF、TGF-β1、VEGF、IGF-I、bFGF、EGF六种主要生长因子为代表，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各生长因子含量。以六种生长因子的含量为激活效果的参考指标，对检测结果进行统计分析，探索最佳激活时间，从而摸索PG上清液制备的最佳条件。　　2.明胶微球的制备：以明胶为原料，戊二醛为交联剂，采用改良的乳化冷凝交联法制备明胶微球，以微球粒径为参考指标，通过单因素实验对明胶微球的制备条件进行优化。用光学显微镜、扫描电镜（SEM）对其大小形貌结构等一般特性进行质量评价。　　3.PG上清明胶缓释微球冻干制品的制备及缓释效果评价：PG上清与制备的明胶微球充分混合之后进行冷冻干燥，ELISA法检测PDGF、TGF-β1、VEGF、IGF-I、bFGF、EGF六种主要生长因子的含量，计算微球吸附生长因子率、载生长因子量，以VEGF的检测量为代表，评价其体外缓释效果。　　4.PG上清明胶微球的初步有效性和安全性评价：用细胞增殖-毒性检测试剂（CCK-8）检测微球对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的增殖及毒性作用。　　研究结果：　　1.PRP激活时间不同，PG上清液中6种生长因子的含量不同。当激活时间为45分钟时，大部分生长因子含量达到最大值。　　2.当明胶溶液浓度为13%、Span80加入量为1.5mL，搅拌速度为750~855r/min时可获得最优的明胶微球制备方案，获得的明胶微球平均粒径为15.95±3.79μm，其中7μm~20.5μm的微球占88.23%。　　3.制备的PG上清中PDGF-BB、TGF-β、VEGF的含量分别为17.033±0.089ng/mL、8.716±0.804ng/mL、285.089±6.342pg/mL，微球吸附PDGF-BB、TGF-β、VEGF生长因子率分别为72.58%、82.99%、87.84%，明胶微球载PDGF-BB、TGF-β、VEGF量分别为123.63pg/mg、72.34g/mg、2.50pg/mg，体外缓释7天，VEGF的累计释放量占总载药量的79.60%。　　4.细胞增殖实验中明胶缓释微球组和PG上清组对HUVECs的促增殖作用均明显高于DMEM完全培养基组，且明胶缓释微球组高于PG上清组，差异显著（p<0.05）；细胞毒性实验中缓释微球浸提液对HUVECs无明显毒性作用。　　实验结论：　　PRP激活制备PG上清的最佳时间以不超过45分钟为宜。制备的明胶缓释微球外观圆整，粒径均匀，分散度良好，吸附生长因子率、载生长因子量及体外缓释效果良好，制备的载血小板凝胶上清明胶缓释微球促细胞增殖作用明显，对细胞无明显毒性作用，初步实现了血小板凝胶上清明胶缓释微球的研制。