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目的:本实验通过检测临床肝脏手术中不同时期患者肝组织HMGB-1的含量、HMGB-1 mRNA的表达及细胞凋亡的情况,探讨HMGB-1在临床肝脏手术中肝缺血再灌注损伤的作用及其关系。为临床选用有效的预处理方法抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemic reperfusion injury,HIRI)提供理论基础。方法:1、标本采集:2007年3月～2009年3月在广西医科大学第一附属医院肝胆外科住院,行肝段切除的肝细胞癌患者36例,患者术前均未行灌注化疗及栓塞治疗,术中均采用Pringle’s法阻断肝门。在肝切手术中,分别在肝门阻断前、肝门阻断开放时、手术结束关腹前取切肝组织3g。分为两份,一份用4%多聚甲醛固定,制作石蜡标本。另一份置于-70℃冰箱中保存,用于提取总RNA。所取标本均经患者本人同意及医院伦理委员会审查同意。2、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HMGB-1 mRNA表达。3、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(Terminal- deoynucleotidle transferase mediated d-UTP nick end labeling, TUNEL)法测定肝组织中肝细胞凋亡。4、免疫组织化学法(S-P法)测定肝组织中HMGB-1蛋白的表达。结果:1、肝组织HMGB-1mRNA的表达,在肝门阻断前为0.5554±0.0843,肝门开放时为1.0703±0.1931,关腹前为1.4028±0.2150。这三个组间的差异有统计学意义(p<0.05)。肝门阻断前HMGB-1 mRNA的表达比肝门开放时减少,关腹前HMGB-1 mRNA的表达要比肝门开放时增加。2、肝细胞凋亡,在肝门阻断前的凋亡指数(Apoptotic Index,AI)为2.89±0.274%,肝门开放时为2.26±0.337%,关腹前为1.51±0.523%。肝细胞凋亡指数在这三个组间的差异有统计学意义(p<0.05)。肝门阻断前的肝细胞凋亡指数高于肝门开放时和关腹前;而肝门开放时肝细胞凋亡指数高于关腹前。3、HMGB-1蛋白的表达用免疫组化染片的分值表示。在肝门阻断前为2.97±0.576,肝门开放时为6.51±1.354,关腹前为10.42±0.985,这三个组间变化的差异有统计学意义(p<0.05)。肝组织中HMGB-1蛋白表达关腹前比肝门开放时显著增加,在肝门开放时比肝门阻断前增加。4、相关性分析:①肝门阻断前肝组织中HMGB-1 mRNA的表达与肝组织HMGB-1蛋白的相关系数γ=0.905,(p<0.01);呈正相关。②肝门阻断前肝组织HMGB-1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数γ= -0.831,(p<0.01);呈负相关。③肝门开放时肝组织HMGB-1 mRNA的表达与肝组织HMGB-1蛋白的相关系数γ=0.927,(p<0.01);呈高度正相关。④肝门开放时肝组织HMGB-1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数γ= -0.878,(p<0.01);呈负相关。⑤关腹前肝组织中HMGB-1 mRNA的表达与肝组织HMGB-1蛋白的相关系数γ=0.9450,(p<0.01);呈正相关。⑥关腹前肝组织HMGB-1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数γ= -0.932,(p<0.01);呈负相关。结论:在正常的肝组织中有少量HMGB-1mRNA和HMGB-1蛋白的表达,肝脏缺血再灌注损伤后的早期,肝组织中HMGB-1 mRNA及HMGB-1蛋白表达增加,且呈上升趋势,提示HMGB-1与HIRI的发生和发展有一定的关系。肝组织缺血再灌注早期,肝细胞的凋亡减少,说明HMGB-1蛋白表达的增加,可能具有一定抑制细胞凋亡作用。