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MicroRNAs (miRNAs)可以参与调控胚胎早期发育,细胞的增殖、分化和凋亡,肿瘤发生及脂类代谢等许多复杂的生物过程,且miRNA在生物体内的表达具有时空特异性。已有研究表明miRNA-101a (miR-101a)参与了细胞的增殖、分化过程的调控,但关于miR-101a对骨骼肌卫星细胞增殖与分化的调控机制尚不清楚。本研究扩增了山羊miR-101a的前体及侧翼序列,分析了miR-101a的组织表达及其对骨骼肌卫星细胞(SMSC)增殖、分化的影响。利用双荧光素酶报告基因检测系统验证了肌肉分化抑制基因EZH2与niR-101a结合的靶位点,并检测了过表达或抑制miR-101a对靶基因EZH2 mRNA表达水平的影响,初步揭示了miR-101a可能通过抑制靶基因的蛋白表达调控骨骼肌发育的分子机制。主要结果如下：1.山羊miR-101la的前体及侧翼序列448 bp,且成熟miR-101a在不同物种中序列高度保守,通过RNAfold软件在线分析表明山羊miR-101a前体符合microRNA结构特征。半定量PCR和荧光定量PCR (RT-qPCR)结果显示]miR-101a在臂三头肌、背最长肌、半膜肌和腰大肌等肌肉组织中的表达量高于心、肝、脾、肺和肾等其他5个内脏组织。2. RT-qPCR检测结果显示Pax7 mRNA在体外培养的SMSC增殖阶段表达量高,分化过程中表达量显著下降(P<0.05); MyoD在增殖及分化初期表达量高；MyoG在分化融合的第三天表达量最高；而MyHC在分化融合过程中表达量逐渐升高。RT-qPCR检测miR-101a在SMSC分化0d、1d、3d、5d、7d的表达量,发现miR-101a在SMSC分化过程中表达量随着分化时间的延长显著增加(P<0.05)。3.过表达或抑制miR-101a后诱导SMSC分化48 h,荧光定量PCR检测肌肉标志基因Pax7、MyoD、MyoG、MyHC mRNA的表达变化,结果显示：过表达miR-101a后,与对照组相比MyoG和MyHC基因表达量显著提高(P<0.01), Pax7和MyoD基因表达量显著下降(P<0.05)；抑制miR-101a后MyoG(P<0.01)和MyHC(P<0.05)基因表达量显著下降,Pax7(P<0.01)和MyoD(P<0.05)基因表达量显著增加,上述结果表明miR-101a能促进SMSC的分化。4.过表达或抑制miR-101a后应用CCK-8细胞增殖和毒性检测试剂分析miR-101a对SMSC增殖的影响,发现过表达或抑制miR-101a与NC对照组相比对细胞增殖的影响不显著(P>0.05)。5.选用PicTar、TargetScan和miRanda软件预测miR-101a的靶基因,筛选出候选靶基因EZH2(肌细胞分化抑制基因),成功构建PGL3-Control-EZH2报告载体。通过双荧光素酶报告基因检测系统验证了靶EZH2的3’-UTR区含有与miR-101a作用的靶位点。6. RT-qPCR检测在SMSC分化Od、1d、3d、5d和7d靶基因EZH2 mRNA的表达水平,及过表达或抑制miR-101a诱导SMSC分化48 h后,EZH2 mRNA的表达量,结果显示：靶基因EZH2在细胞分化过程中的表达量下调,而过表达或抑制miR-101a后,与对照组相比EZH2 mRNA表达量变化不显著(P>0.05),表明miR-101a可能是通过调控靶基因EZH2的蛋白水平来促进骨骼肌分化的。