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目的:在开展实验红鲫标准化及其应用研究的基础上,进一步研究实验红鲫在氯化镉胁迫下AFLP标记和SSR标记多态性的改变,探讨AFLP标记和SSR标记对镉污染的预警作用。方法:以实验红鲫为实验对象,经不同浓度、不同时间的氯化镉染毒处理后,分别进行AFLP、SSR标记多态性分析。根据前期实验得出的氯化镉对实验红鲫的96h LC50,设置96h LC50的1/16、1/8、1/4、1/2等4个不同浓度的氯化镉染毒组和1个对照组,对实验红鲫染毒8d。从染毒当天起,每隔2天活体采集实验红鲫尾静脉血液,提取血细胞DNA,以作AFLP、SSR标记多态性分析备用。先以EcoR I、Trul I和T4DNA,DNA经酶切-连接,然后以8对引物进行选择性PCR扩增;再采用Quantity one软件,分析AFLP标记PCR扩增凝胶图谱;用PopGene软件统计各组实验红鲫AFLP标记PCR扩增条带数(N)、扩增片段大小、多态性位点数(Np)、基因多态性含量(PIC);最后用Origin8.0软件分析多态性信息含量。从鲫鱼SSR引物中选取其中6对SSR引物对实验红鲫DNA进行PCR扩增,扩增产物用Quantity one软件和PopGene软件进行图谱分析,统计出每个SSR标记的等位基因数目(Na)、有效等位基因数目(Ne)、基因杂合度(H)、多态性信息含量(PIC);最后用Origin8.0软件分析基因杂合度和多态性信息含量。结果:1. AFLP标记多态性:8对不同引物的PCR扩增条带数从18到30不等,多态性条带数从14到24不等。在正常组实验红鲫中,由8对引物扩增的条带为65条,多态性条带总数目为30个;在氯化镉染毒组实验红鲫中,由8对引物扩增的条带数目为182个,多态性条带为147条。其中,在1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫中,多态位点总数增加到36个,而在1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第6d的实验红鲫中,多态位点数目达到41个。以引物E-ACC/T-CTC扩增的条带数,正常组的实验红鲫为10条,在8对引物中为最多,1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第4d的实验红鲫为12条。以引物E-ACA/T-CTT和引物E-AAC/T-CAG扩增的条带数,正常组的实验红鲫为7条,多态性条带为3条,在正常组8对引物中最低。以引物E-ACA/T-CTC1/2LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第8d的扩增条带为2条,多态性条带为1条,在8对引物中为最低。对8对引物的PCR扩增产物进行分析,在正常组实验红鲫中,AFLP标记多态性信息含量平均值为46.15%,在氯化镉染毒组实验红鲫中,AFLP标记多态性信息含量达到80.77%。其中,以引物E-AAC/T-CAT扩增的多态性含量,正常组中的实验红鲫为37.50%,在8对引物中为最低,在氯化镉染毒组中的实验红鲫为75.00%;以引物E-ACT/T-CTC扩增的多态性含量,正常组中的实验红鲫为62.50%,在8对引物中为最高;以引物E-ACA/T-CTC扩增的多态性含量,在氯化镉染毒组中的实验红鲫为85.71%,在8对引物中为最高。2. SSR标记多态性:6对SSR引物的PCR扩增的多态位点数目,正常组中的实验红鲫为0,氯化镉染毒组中的实验红鲫,随着氯化镉浓度的升高和染毒时间的延长,多态位点数目也随之增加。其中,在1/16LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫,多态位点数目最少,为8个;在1/2LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫,多态位点数目增加到12个;而在1/4LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第6d的实验红鲫,多态位点数目为20个,达到峰值。6对SSR引物的PCR扩增的基因多态性含量,在1/16LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫的基因多态性含量最小,为25.00%;在1/2LC50浓度的氯化镉染毒组和1/4LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫,基因多态性含量分别为34.38%和37.50%;在4个不同浓度的氯化镉染毒组染毒第4d的实验红鲫,基因多态性含量均表现出中度多态性;在1/4LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第6d的实验红鲫的基因多态性含量为62.50%,为高度多态性,且达到峰值。6对SSR引物的PCR扩增的基因杂合度,在1/16LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫的基因杂合度为0.11±0.20;从此开始,随着氯化镉浓度的增大和染毒时间的延长,实验红鲫基因杂合度的变化具有递增的趋势。其中,在1/8LC50浓度氯化镉染毒组染毒第4d的实验红鲫,其基因杂合度为0.17±0.22;在1/4LC50浓度氯化镉染毒组染毒第6d的实验红鲫,其基因杂合度为0.28±0.22;在1/2LC50浓度氯化镉染毒组染毒第8d的实验红鲫,其基因杂合度为0.12±0.20。结论:1.一定浓度的氯化镉可致实验红鲫AFLP和SSR多态性改变。2.AFLP和SSR标记多态性信息含量变化具有随氯化镉浓度的增加和染毒时间的延长而升高的趋势。3.AFLP和SSR标记可作为预警镉污染的生物标记物。